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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物二聚体如何识别
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 引物二聚体如何识别 已有2人参与

这是我刚跑完的电泳图，用的是2000bp的marker，我的目的条带应该是128bp，如何确定我这儿得到的条带是目的条带还是引物二聚体呢？急求大家帮忙啊！

12.jpg
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1楼 2012-10-17 10:25:01
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★有帮助 2012-10-17 15:00:33
这个确实不好看，应该是目的片段，可以用定量PCR跑一下，看看溶解曲线就知道了
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2楼2012-10-17 10:54:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★有帮助 2012-10-17 15:00:42
琼脂糖电泳是有些不容易，去跑下PAGE胶吧。
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3楼2012-10-17 11:43:57
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-10-17 15:01:13
胶的浓度高一些，100bp左右的可以用1.5%-2%的胶跑，应该能跑开的，引物二聚体一般比100bp的marker条带略小，你的目的条带比100 bp大。
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4楼2012-10-17 12:10:19
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-17 15:01:38
从你条带的大小可以初步确定是你的目的条带，要具体验证就按照楼上的说法！
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持之以恒、永不放弃！
5楼2012-10-17 13:32:37
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不换一下小片段的marker呢？你用的marker太大，而目的片段太小，没法对应的看清楚啊
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6楼2012-10-17 15:41:47
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-10-17 15:41:47
为什么不换一下小片段的marker呢？你用的marker太大，而目的片段太小，没法对应的看清楚啊

目前我们实验室最小的marker就是2000的了，条件所限吧，我下一步要做荧光定量的，我就是想问一下有没有比较简单的方法排除二聚体的存在便于下一步操作。
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7楼2012-10-17 16:55:40
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小星丹925

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我用2000marker跑的时候 100bp和250bp中间有挺大一块距离呢，你是不是跑的时间太短了，可以跑久点，把胶浓度配大一点，差不多能看出来的，我的目的片段都在100-150之间，用的也是2000marker
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。竹杖芒鞋轻胜马， 谁怕？一蓑烟雨任平生。
8楼2013-12-29 20:54:40
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hippo_li at 2012-10-17 12:10:19
胶的浓度高一些，100bp左右的可以用1.5%-2%的胶跑，应该能跑开的，引物二聚体一般比100bp的marker条带略小，你的目的条带比100 bp大。

请问，你说引物二聚体一般是100bp大小？有依据没有。
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9楼2014-08-01 10:49:51
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