| 查看: 2893 | 回复: 18 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
handsome1984铁虫 (小有名气)
|
[求助]
Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
|
||
| 大家好，有人构建过Fosmid大片段约40Kb左右的基因组文库吗？筛选阳性克隆可以用特异性引物PCR筛选吗？另外测序是怎么测呢？是提取质粒DNA直接测？片段太大了，好像测不了啊。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 functional genomics |
» 猜你喜欢
申博发邮件
已经有5人回复
-
各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
国社科系统bug了，是不是要放榜了？
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pfu扩增片段克隆测序
已经有9人回复
- 微卫星标记开发过程送测序的阳性克隆如何
已经有4人回复
- 请教一下fosmid测序问题
已经有3人回复
- BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事
已经有17人回复
【答案】应助回帖
|
非常感谢回复。我还有一下疑问请教： 我的DNA是提取后用低熔点琼脂糖纯化过一次，用DNA浓度测定仪检测浓度为5000ng/ul，A260/A280=2.072, A260/A230=2.423，这个参数应该是可以的吧。DNA的大小>40kb，我没有大的Marker，用试剂盒带的conrtrol DNA和λ/Hind III 做的marker，有图片。条带从左到右分别是：λ/Hind III （15ul），conrtrol DNA（2.5ul），未剪切样品，剪切500次样品。后面两个是师妹的，片段比我的小。胶破损了，所以有那个长长的亮带。 问题来了，普通的λ/Hind III 可以用来做脉冲吗？总感觉23K的那条带和conrtrol DNA离得太近了。我的片段这么大的，不做剪切直接补平可以吗？上次做的时候还做了切胶回收，从23K带的上边缘切到conrtrol DNA带的上边缘。我看您说片段越大越好，那您的意思是不用切胶回收也可以的吗？ 平板涂布后第三天菌落才长出来。据说氯霉素要皮实些不会很快失效，请问一般在37度能维持几天呢？我用原液做的宿主侵染，比率也扩大一倍，用了20ul，最后得到了大约900多个克隆。 侵染后浓度滴定实验时，用不同的稀释浓度涂布，生长状况差不多，10的负1次方和10的负5次方生长的菌落数相差不大，30-50个左右。 以上就是目前碰到的一些问题，说的多，不知道您能不能看明白，还请您不吝赐教。多谢。  11.9脉冲.jpg |
8楼2012-11-21 10:37:06
2楼2012-10-13 15:44:45
3楼2012-10-14 19:29:45
jinpeng_6118
木虫 (正式写手)
- MicEPI: 2
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 5027
- 散金: 25
- 红花: 2
- 帖子: 856
- 在线: 147.9小时
- 虫号: 1019189
- 注册: 2010-05-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
4楼2012-10-15 18:44:02
10