应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态转化
281/1返回列表
查看: 2586  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

380218013

金虫 (小有名气)

[交流] 感受态转化

最近小弟做感受态转化实验。结果发现空的感受态在AMP平板也长菌落。AMP平板式100毫升+100微升AMP（100毫克每毫升），这样终浓度是100微克每毫升。有木有人有同样的经历和解决办法啊 ？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-10-13 09:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
氨苄只是抑菌，并且一般认为超过18h氨苄失效，所以如果空的感受态细胞培养时间太长并且密度很大的情况下也可能会长
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-10-13 16:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frcheng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议热激42s试试
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2012-10-14 08:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马儿快跑

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
42度热激45秒就够了  我们是这样做的  效果很好的，像你种情况楼上各位已经分析的很透彻了，一是感受态被污染或突变了，一个是抗生素失效了！你可以再重复一次！
赞一下(1人) 回复此楼
27楼2012-10-16 15:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

seraph09

新虫 (初入文坛)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
你得感受态是买的还是自己做的？能不能详细说明你得转化步骤？
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-13 09:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
AMP是否有效？感受态是自制还是购买？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-13 09:30:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
380218013(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-13 16:28:05
如果是购买的感受态细胞，应该不能在氨苄板上长，有可能是抗生素部分失效，或者是到平板是培养基太热。氨苄对温度比较敏感，到板时要让培养基温度冷却到50度以下再加抗生素。
如果自制的感受态，有可能是做感受态过程中有污染。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-13 09:45:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolvesdancer

铁杆木虫 (正式写手)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
空载的菌本来就能长，可以做蓝白斑筛选确定阳性转化子
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-13 10:23:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daisy143

至尊木虫 (著名写手)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
帮顶
回复此楼
7楼2012-10-13 12:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)
★
380218013(金币+1): 谢谢参与
建议做个蓝白斑筛选！
赞一下 回复此楼
9楼2012-10-13 17:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by seraph09 at 2012-10-13 09:17:17
你得感受态是买的还是自己做的？能不能详细说明你得转化步骤？

买的感受态。步骤质粒50ng加50ul感受态 冰上30min 42°热激 90s 冰上三分钟。加200ul 无AMP培养基扩增30min，涂布平板。过夜。
赞一下 回复此楼
10楼2012-10-13 19:57:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by j2 at 2012-10-13 09:30:57
AMP是否有效？感受态是自制还是购买？

我第一次也以为是AMP失效  新配的 还是长的 。感受态是买的
赞一下 回复此楼
11楼2012-10-13 19:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-13 09:45:36
如果是购买的感受态细胞，应该不能在氨苄板上长，有可能是抗生素部分失效，或者是到平板是培养基太热。氨苄对温度比较敏感，到板时要让培养基温度冷却到50度以下再加抗生素。
如果自制的感受态，有可能是做感受态过 ...

AMP 是先配的  加的温度注意了，手可以握着瓶子的时候加的AMP 应该不是温度的原因。
赞一下 回复此楼
12楼2012-10-13 19:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolvesdancer at 2012-10-13 10:23:23
空载的菌本来就能长，可以做蓝白斑筛选确定阳性转化子

其实我也想知道空载的菌是不是可以长的。。你这么肯定的话 我心理就有数了
赞一下 回复此楼
13楼2012-10-13 20:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by joan198108 at 2012-10-13 16:56:55
氨苄只是抑菌，并且一般认为超过18h氨苄失效，所以如果空的感受态细胞培养时间太长并且密度很大的情况下也可能会长

就是说空载的感受态本身是可以再AMP上长的是吗？？我是涂布之后过夜的  肯定过18h了
赞一下 回复此楼
14楼2012-10-13 20:01:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-13 17:15:23
建议做个蓝白斑筛选！

能否给个步骤啊 大虾。没有做过呢
赞一下 回复此楼
15楼2012-10-13 20:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolvesdancer

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by 380218013 at 2012-10-13 20:00:23
其实我也想知道空载的菌是不是可以长的。。你这么肯定的话 我心理就有数了...

你的问题没说太详细，具体用的什么载体？
如果Amp抗性是载体上的，那空载的菌长出来很正常啊，不长才不正常
赞一下 回复此楼
18楼2012-10-13 23:35:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 380218013 at 2012-10-13 20:01:28
就是说空载的感受态本身是可以再AMP上长的是吗？？我是涂布之后过夜的  肯定过18h了...

你的空对照是加了空载体，还是直接用感受态细胞做的呀？什么都不加或者加水做的空对照不能在氨苄板上长。如果是查看载体自连的情况用没加插入片段的空载体做的对照是可以在抗性板上长的。至于时间过长而导致氨苄失效的问题要看你空板上的菌落大小，是否和转化了连接产物的一样呢？
赞一下 回复此楼
19楼2012-10-14 01:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-14 01:17:19
你的空对照是加了空载体，还是直接用感受态细胞做的呀？什么都不加或者加水做的空对照不能在氨苄板上长。如果是查看载体自连的情况用没加插入片段的空载体做的对照是可以在抗性板上长的。至于时间过长而导致氨苄失 ...

直接感受态涂布的   菌落大小稍微比转质粒的大一点。
赞一下 回复此楼
21楼2012-10-14 09:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by wolvesdancer at 2012-10-13 23:35:39
你的问题没说太详细，具体用的什么载体？
如果Amp抗性是载体上的，那空载的菌长出来很正常啊，不长才不正常...

PGL sv40载体 是AMP抗性的 现在问题是我只用感受态，不转化，涂布AMP也长了很多菌落
赞一下 回复此楼
22楼2012-10-14 09:55:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by frcheng at 2012-10-14 08:50:45
建议热激42s试试

大哥 可以吗
回复此楼
23楼2012-10-14 09:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by 380218013 at 2012-10-14 09:52:05
直接感受态涂布的   菌落大小稍微比转质粒的大一点。...

如果氨苄的板没问题的话，检查复苏是所加LB是否污染。还有可以你挑几个菌落在液体LB+AMP培养过夜看看是不是正常。
赞一下 回复此楼
24楼2012-10-14 14:58:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
25楼2012-10-15 13:26:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzlatqh

银虫 (小有名气)
就是amp平板失效了。。。
赞一下 回复此楼
26楼2012-10-16 00:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞又美好

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
极有可能是AMP失效了，因为这个我就出现过这种情况百思不得其解，最后终于找到了原因，建议重新买一瓶配好的AMP，如果买到的是固体粉末一定要用细菌滤器过滤，要严格按照无菌操作
赞一下(1人) 回复此楼
28楼2012-10-16 16:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
flyxu6楼
2012-10-13 10:46   回复  
380218013(金币+1): 谢谢参与
chenzhana16楼
2012-10-13 20:30   回复  
380218013(金币+1): 谢谢参与
chenruia17楼
2012-10-13 20:41   回复  
380218013(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 380218013 的主题更新
281/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭