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远哥不傻b木虫 (正式写手)
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[求助]
关于液相条件的问题
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想向各位大侠请教个问题:在液相检测过程中，检测条件是如何确定的？什么时候用梯度，什么时候用等度？ PS:我在进液相的时候总是用文献中的已知条件或者是师兄师姐告诉的方法做，但是对于梯度和等度之间有什么区别理解不上去啊，假如我遇到一个未知的物质，我该怎样选条件进行检测呢？ 理论基础太次，希望大家多多指教！最好说的详细一些， 呵。。呵。。 多谢各位大侠啦·~ |
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容月~
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分析条件，能用等度尽量用等度，梯度洗脱平衡时间长，重现性差，如果是做方法学，将带来一定的麻烦。 等度条件下杂质与主成分分离度达不到要求时，可以进行有机相比例、ph值、盐浓度筛选，这些条件都不行的情况下再用梯度。 梯度条件可以将杂质与主成分很好的分离，但是由于其比例在不停的变化，所以平衡存在问题，重现也是一个问题，因此就对试剂色谱柱要求很高。当流动相中存在离子对试剂时，用梯度洗脱更是一个问题 |
2楼2012-10-08 13:29:32
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3楼2012-10-08 15:03:53
bcschina
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毫无疑问 对于未知样品 当然首推梯度 其实这个问题不难理解 气相和液相 彼此相通之处 就是可以把液相的梯度洗脱 理解为气相的程序升温 一个是通过温度的变化 使被分离物质逐个脱离气相柱的固定液 而液相则是通过流动相极性的变化 逐个使被分离物质 一一洗脱 所以 如果样品成分比较单一 各个组分极性或者官能团比较类似 很明显出峰肯定会比较靠近 这时肯定用等度的洗脱 才能获得比较好的分离效果 用梯度的话 由于极性变化大 很容易一起挤在一起出峰 无法获得好的分离效果 反之 如果样品成分复杂 必须要用不同的大范围的极性变化的流动相 才能一一洗脱 那就只能用梯度了 当然 也可以在有类似成分的时候 让等度的流动相多走一会儿 待成分洗脱后 再继续梯度洗脱 梯度洗脱对保护柱子 只要不是太多水相的 实际上就是在冲洗柱子 对柱子有益的 但我对二楼的观点有点不能苟同 梯度洗脱的重现性差 我觉得如果仪器性能OK的话 梯度洗脱由于极性的变化幅度大 洗脱能力强 实际上更能稳定保留时间 这是很容易理解的 如同气相的程序升温是一个道理 我刚接触液相时 大多是等度的 但后来做了很多新方法 发现国外老外们 通常更喜欢梯度 呵呵 |
4楼2012-10-08 17:52:49
lankywang
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远哥不傻b: 金币+4, ★★★很有帮助, 多谢~多谢~ 2012-10-09 15:15:31
远哥不傻b: 金币+4, ★★★很有帮助, 多谢~多谢~ 2012-10-09 15:15:31
| 对于未知的我们刚开始不知道出峰情况的，我们是要先用梯度，根据出峰情况算出有机相比例。知道比例后，我觉得还是要先用等度，能分开就不用梯度。首先等度重现性好，操作简便。做质量标准研究的时候很容易。梯度是好，可以使分离度、理论塔板数、拖尾因子、出峰时间等都可以达到要走求。但是我们做了那么多方法学之后发现，梯度对试剂、仪器、环境等条件要求很高，还要先从成本考虑。稍微有点不达条件都会使实验结果有差异。因此在时间多，安排不紧的情况下，我们都会先从等度开始再到梯度。 |
6楼2012-10-09 10:17:47
