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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化遇到问题
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 乱舞成影 at 2012-09-23 14:39:08
最主要的先是超声破碎一定要完全 。
上柱子的时候建议金属亲和柱，可能效果好一些。
要不你再做一个透析吧 透析液里加点甘油。。。

好的，谢谢您的建议！我们实验室用的NI-柱
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11楼2012-09-25 16:42:03
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-09-24 12:19:23
当然可以，但上柱子前样品要透析换缓冲液，你知道吧

直接用透析袋做吗？我的样品不是很多。
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12楼2012-09-25 16:43:09
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ypan at 2012-09-24 13:30:49
用的是什么标签，His还是GST？
一般这两种比较常用，多采用亲和层析的方法。
在之前一般是要用超声波破碎的方法破碎细胞。
我之前是用His标签的，用的是Novagen公司的亲和层析镍柱分离目的蛋白，当然这是5年前的 ...

用的His标签，纯化也用的Novagen公司的镍柱
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13楼2012-09-25 16:44:29
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 淡竹2066 at 2012-09-25 16:43:09
直接用透析袋做吗？我的样品不是很多。...

填充一下稀释也可以
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
14楼2012-09-25 17:18:45
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ypan

木虫 (著名写手)
缓冲液的PH值非常重要，直接影响你跑SDS-PAGE的结果。照楼主的图片结果，估计你的缓冲液PH值发生了变化，或者不新鲜。用之前一定要测定PH值。
缓冲液配置中的主要产品咪唑、盐酸胍、硫酸镍，建议购买高质量的公司产品，国外的有sigma、Amresco、Promega等，国产的有Aladdin（阿拉丁）等。
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15楼2012-09-27 09:05:09
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Happy实验室

新虫 (初入文坛)
不是很合适，可以考虑先将溶液透析一下，将小分子去掉，然后再过柱子，否则还是结合不上去，因为你蛋白溶液中本身含有洗脱液。
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16楼2012-10-02 23:17:30
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