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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

各位虫友,大家好!我最近在做可溶性蛋白的诱导表达,好不容易表达出来,但是纯化的时候没摸好条件,洗脱时没有把杂蛋白去除干净,我还能再将洗脱下来的蛋白重新上柱再洗脱一次吗?
为我用的宿主菌是革兰氏阳性菌,每次超声破碎都很麻烦,要好几个小时,而且我的要求不高,只要能纯化到我的目的蛋白就行。
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-09-24 12:19:23
当然可以,但上柱子前样品要透析换缓冲液,你知道吧

直接用透析袋做吗?我的样品不是很多。
12楼2012-09-25 16:43:09
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Jorming033

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:17
电泳之后蛋白一般都已经变性了,不能在层析。但你如果用原始混有杂蛋白的原溶液是可以再次层析纯化的。
论文命运真多折,希望是好事多磨,祈求好运
2楼2012-09-23 09:16:36
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水凝胶

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:24:22
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:31
可以,我们实验室的可溶性蛋白是过两次柱子,凝胶柱和金属亲和柱,你可以尝试用不同的柱子。你的蛋白好杂最好在上样处理一下,比如说盐析之类的,
3楼2012-09-23 10:05:02
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小神龙198901

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1, 有帮助 2012-09-25 16:45:48
可以的,或者你也可以再跑下非变性电泳,应该也是没问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
加油你能行
4楼2012-09-23 10:42:08
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