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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化遇到问题
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

各位虫友，大家好！我最近在做可溶性蛋白的诱导表达，好不容易表达出来，但是纯化的时候没摸好条件，洗脱时没有把杂蛋白去除干净，我还能再将洗脱下来的蛋白重新上柱再洗脱一次吗？
为我用的宿主菌是革兰氏阳性菌，每次超声破碎都很麻烦，要好几个小时，而且我的要求不高，只要能纯化到我的目的蛋白就行。
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1楼 2012-09-23 09:09:01
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ypan

木虫 (著名写手)
缓冲液的PH值非常重要，直接影响你跑SDS-PAGE的结果。照楼主的图片结果，估计你的缓冲液PH值发生了变化，或者不新鲜。用之前一定要测定PH值。
缓冲液配置中的主要产品咪唑、盐酸胍、硫酸镍，建议购买高质量的公司产品，国外的有sigma、Amresco、Promega等，国产的有Aladdin（阿拉丁）等。
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15楼2012-09-27 09:05:09
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Jorming033

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:17
电泳之后蛋白一般都已经变性了，不能在层析。但你如果用原始混有杂蛋白的原溶液是可以再次层析纯化的。
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论文命运真多折，希望是好事多磨，祈求好运
2楼2012-09-23 09:16:36
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水凝胶

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:24:22
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:31
可以，我们实验室的可溶性蛋白是过两次柱子，凝胶柱和金属亲和柱，你可以尝试用不同的柱子。你的蛋白好杂最好在上样处理一下，比如说盐析之类的，
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3楼2012-09-23 10:05:02
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小神龙198901

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1, ★有帮助 2012-09-25 16:45:48
可以的，或者你也可以再跑下非变性电泳，应该也是没问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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加油你能行
4楼2012-09-23 10:42:08
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查看全部 16 个回答
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