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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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在线: 45.6小时
虫号: 967802
注册: 2010-03-11
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 蛋白纯化遇到问题

各位虫友，大家好！我最近在做可溶性蛋白的诱导表达，好不容易表达出来，但是纯化的时候没摸好条件，洗脱时没有把杂蛋白去除干净，我还能再将洗脱下来的蛋白重新上柱再洗脱一次吗？
为我用的宿主菌是革兰氏阳性菌，每次超声破碎都很麻烦，要好几个小时，而且我的要求不高，只要能纯化到我的目的蛋白就行。

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1楼2012-09-23 09:09:01

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ypan

木虫 (著名写手)

应助: 14 (小学生)
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红花: 1
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在线: 115.3小时
虫号: 314413
注册: 2007-02-25
专业: 生物物理、生物化学与分子

缓冲液的PH值非常重要，直接影响你跑SDS-PAGE的结果。照楼主的图片结果，估计你的缓冲液PH值发生了变化，或者不新鲜。用之前一定要测定PH值。
缓冲液配置中的主要产品咪唑、盐酸胍、硫酸镍，建议购买高质量的公司产品，国外的有sigma、Amresco、Promega等，国产的有Aladdin（阿拉丁）等。