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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒电泳问题

最近做酶切,遇到一个非常神奇的事情。 希望大家能够解释下,非常感谢!
1.双酶切后,质粒大小与理论符合;
2.原质粒没有酶切,但是却比酶切后的质粒跑得慢!!!
一般质粒提出来之后以超螺旋形态的居多,而且超螺旋在电泳中的迁移速度最快,为什么会跑在线性的之后呢?真神奇,几次都是同样的结果,是不是质粒有问题啊?我用宝生物、生工的试剂盒提取了之后都是这样,这是怎么回事呢?
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 16:06:35
从楼主图上来看,原质粒的位置大概在7000左右的位置,但如果5300环状质粒跑的位置应该是在4300线性位置,所以无论如何这个都不是pET28a,很有可能是pET28a插入了较大的目的片段,楼主还需要自己回想下有没有拿错菌, ...

我再确认一下吧,已经开始做连接了,如果这一步有问题,下面根本就不能成功。两个酶切位点之间就差了29bp,双酶切之后的条带是不是也不大正常啊,怎么离5000那么近,你看呢?
9楼2012-09-20 18:54:29
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主能不能把质粒的情况说的具体点,是载体质粒?大小大概是多少?如果能附图就更好了
有时候,一句话,可以改变未来
2楼2012-09-20 13:03:08
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 13:03:08
楼主能不能把质粒的情况说的具体点,是载体质粒?大小大概是多少?如果能附图就更好了

我的质粒是pET28a,5.3kb左右,用的marker是5000的,如图所示,marker旁边的是原质粒,其次是双酶切之后的质粒,结果很匪夷所思。。。请你帮忙分析看看。
3楼2012-09-20 14:31:09
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 13:03:08
楼主能不能把质粒的情况说的具体点,是载体质粒?大小大概是多少?如果能附图就更好了

附图如下:

Administrator 2012-09-19 16hr 40min.jpg

4楼2012-09-20 14:34:22
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