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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 实时定量PCR中提取RNA的问题
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2002ymx

铜虫 (初入文坛)

[求助] 实时定量PCR中提取RNA的问题

我现在正在做实时定量PCR，已将RNA提出。现有几个问题，希望帮助解答一下：
1.RNA提出后，我用DNA降解酶降解了一下，发现CDNA第一链合成试剂盒上说明还进行去除RNA的步骤，请问一定要做吗？
2.我想先用普通PCR先筛选一下引物，不用荧光PCR行吗？（我得去别的实验室借用荧光PCR），苦呀！
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1楼 2012-09-20 10:02:39
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xiyanwei1234

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励一下 2012-12-14 13:35:45
我不是专业的，只是接触过这方面的。
试剂盒上既然说了就做吧，可能提的不干净
第二个问题我不会，没用过荧光PCR
希望有其他专业的给你建议吧，你的问题我就有好多问题。sorry
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龙飞凤舞
2楼2012-09-21 16:00:17
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hellohuo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, 多谢回答 2012-12-14 13:36:04
2002ymx: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 08:45:34
第一个问题，我觉得按着试剂盒说的做应该问题不大，同意楼上的。至于第二个问题，我的师姐们告诉我在做实时定量之前有必要再做一次普通的PCR，来确定合适的引物以及优化PCR条件，这样再去做定量的时候就不会重复。毕竟做定量的费用要高于普通PCR的~
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3楼2012-12-14 09:47:30
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2002ymx

铜虫 (初入文坛)
谢谢各位，我已做完荧光PCR，上面的问题已解决。
我的经验是：1尽量找好一些的试剂，我用过两种CDNA合成试剂盒，第一种特别浪费RNA，P的效果也不理想，后找了东洋坊的试剂盒就很理想，有人告诉我天根更好，但是考虑钱的方面我还是用了东洋坊的，真希望自己是大牛，这样花钱不愁，也能出好东西。
2.不耻下问，我们自己的实验室基本不做分子的实验，弄的我只能上别的实验室问，惨的是别的实验室也是做大田的，而我做的是树木，有时会到别的学校找人问，过程有点艰辛，但一切都是值得的。回顾以前的实验历程，如果我肯早一点开口问，可能实验会早半年完成。
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4楼2013-01-06 08:27:41
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