24小时热门版块排行榜    

查看: 1229  |  回复: 3

2002ymx

铜虫 (初入文坛)

[求助] 实时定量PCR中提取RNA的问题

我现在正在做实时定量PCR,已将RNA提出。现有几个问题,希望帮助解答一下:
1.RNA提出后,我用DNA降解酶降解了一下,发现CDNA第一链合成试剂盒上说明还进行去除RNA的步骤,请问一定要做吗?
2.我想先用普通PCR先筛选一下引物,不用荧光PCR行吗?(我得去别的实验室借用荧光PCR),苦呀!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiyanwei1234

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励一下 2012-12-14 13:35:45
我不是专业的,只是接触过这方面的。
试剂盒上既然说了就做吧,可能提的不干净
第二个问题我不会,没用过荧光PCR
希望有其他专业的给你建议吧,你的问题我就有好多问题。sorry
龙飞凤舞
2楼2012-09-21 16:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
看天: 金币+3, 多谢回答 2012-12-14 13:36:04
2002ymx: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 08:45:34
第一个问题,我觉得按着试剂盒说的做应该问题不大,同意楼上的。至于第二个问题,我的师姐们告诉我在做实时定量之前有必要再做一次普通的PCR,来确定合适的引物以及优化PCR条件,这样再去做定量的时候就不会重复。毕竟做定量的费用要高于普通PCR的~
3楼2012-12-14 09:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2002ymx

铜虫 (初入文坛)

谢谢各位,我已做完荧光PCR,上面的问题已解决。
我的经验是:1尽量找好一些的试剂,我用过两种CDNA合成试剂盒,第一种特别浪费RNA,P的效果也不理想,后找了东洋坊的试剂盒就很理想,有人告诉我天根更好,但是考虑钱的方面我还是用了东洋坊的,真希望自己是大牛,这样花钱不愁,也能出好东西。
2.不耻下问,我们自己的实验室基本不做分子的实验,弄的我只能上别的实验室问,惨的是别的实验室也是做大田的,而我做的是树木,有时会到别的学校找人问,过程有点艰辛,但一切都是值得的。回顾以前的实验历程,如果我肯早一点开口问,可能实验会早半年完成。
4楼2013-01-06 08:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2002ymx 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +6 chengyan1220 2026-08-21 6/300 2026-08-21 14:47 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见