24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1618  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[求助] 紧急求助5‘RACE(测序结果问题)

鄙人最近在做5’RACE,用的是Clontech的SMARTer RACE cDNA Amlification Kit试剂盒。巢式PCR玩切胶回收,纯化测序,测序结果是这样子的:出来一个100多得片段,经过同源比对,发现这个片段比其他物种的基因片段5‘端少20左右bp,但是在测出的片段中巢式前、后特异性引物都是有的。   就想请教一下:1,巢式PCR前、后特异性引物都能找到,但是片段比同源植物的基因片段5’端小20bp,有可能是在做5‘RACE前,提取的RNA在5’末端稍有降解,导致反转录出的片段不是完整的片段?  2、有没有可能这个植物中的这个基因片段就是比其他同源植物中的该基因片段小?  
  谢谢各位大侠!!!  小弟在此谢过!!!  急-------
回复此楼
勤能补拙
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wushuwei1104: 金币+3, 有帮助 2012-09-14 11:23:40
引用回帖:
5楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-14 11:07:48
没有呀!!悲剧的实验!...

那你也不要灰心,顺利的话你一周就可以搞定5’端全序列。祝好运!
持之以恒、永不放弃!
6楼2012-09-14 11:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的基因5‘端测序只有200多bp,那就是你最开始设计引物的序列靠近5’端。既然你现在还缺20bp左右,你可以根据现在的两个片段拼接之后的序列,重新设计引物,再次做PCR扩增,如果没有得到更长的序列就可以考虑:你的基因片段比其他同源植物中的该基因片段小。以上纯属个人观点,仅供参考!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-09-14 10:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-14 10:14:22
你的基因5‘端测序只有200多bp,那就是你最开始设计引物的序列靠近5’端。既然你现在还缺20bp左右,你可以根据现在的两个片段拼接之后的序列,重新设计引物,再次做PCR扩增,如果没有得到更长的序列就可以考虑:你的 ...

谢谢,有没有更好的建议或看法,因为鄙人快要毕业了!
勤能补拙
3楼2012-09-14 10:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-09-14 10:46:02
谢谢,有没有更好的建议或看法,因为鄙人快要毕业了!...

有没有你需要的物种中该基因的EST序列,有的话可以试着将5‘端拼接起来。没有那你就只能继续P,继续测序了。
持之以恒、永不放弃!
4楼2012-09-14 11:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 287求调剂 +14 land xuxu 2026-03-26 14/700 2026-03-30 18:38 by 544594351
[考研] 322求调剂:一志愿湖南大学 材料与化工(085600),已过六级。 +9 XX小邓 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:18 by limeifeng
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 277跪求调剂 +7 1915668 2026-03-27 11/550 2026-03-30 12:49 by fangnagu
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-03-29 8/400 2026-03-30 10:41 by AZMK
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-24 6/300 2026-03-29 20:45 by 无际的草原
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 6/300 2026-03-29 14:16 by Qshers
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
信息提示
请填处理意见