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汕头大学海洋科学接受调剂
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lixilei1314

金虫 (小有名气)


[交流] 原核表达氨基酸序列

如题,要做原核表达,然后纯化蛋白做抗原去制备抗体。现在扩出来的序列和最开始克隆基因的时候序列相比,氨基酸有个别差异(比如250个氨基酸的序列有2个差异)。挑了几个菌去测序都是这个问题。所以想请教一下大家,这种情况会影响后面的抗体功能吗?
个人分析其他原因是:也有可能是刚开始克隆基因的时候的序列有突变的原因,也或许是个体的SNP差异吧。
想请教一下大家对这个问题的看法!
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小小技术官

木虫 (正式写手)



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有影响,若不是关键的氨基酸还是可以的。制备抗体的时候,主要依靠抗原表位的免疫原性来刺激产生针对该表位的抗体。但是如果测序不正确,肯定会影响你SCI的影响因子的。
4楼2012-09-14 13:18:24
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jiangyhai

金虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
氨基酸有差异是扩增的酶保真性不够吧。是否SNP可以再uniprot里面看的。
2楼2012-09-14 08:39:31
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lixilei1314

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-09-14 08:39:31
氨基酸有差异是扩增的酶保真性不够吧。是否SNP可以再uniprot里面看的。

那如果是因为扩增酶的原因,那这两个氨基酸的差异还能继续制备抗体吗?主要觉得再重新做的话,时间浪费太多了。
3楼2012-09-14 12:10:38
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