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lixilei1314

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达氨基酸序列

如题，要做原核表达，然后纯化蛋白做抗原去制备抗体。现在扩出来的序列和最开始克隆基因的时候序列相比，氨基酸有个别差异（比如250个氨基酸的序列有2个差异）。挑了几个菌去测序都是这个问题。所以想请教一下大家，这种情况会影响后面的抗体功能吗？
个人分析其他原因是：也有可能是刚开始克隆基因的时候的序列有突变的原因，也或许是个体的SNP差异吧。
想请教一下大家对这个问题的看法！
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1楼 2012-09-13 21:45:19
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
★
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氨基酸有差异是扩增的酶保真性不够吧。是否SNP可以再uniprot里面看的。
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2楼2012-09-14 08:39:31
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lixilei1314

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-09-14 08:39:31
氨基酸有差异是扩增的酶保真性不够吧。是否SNP可以再uniprot里面看的。

那如果是因为扩增酶的原因，那这两个氨基酸的差异还能继续制备抗体吗？主要觉得再重新做的话，时间浪费太多了。
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3楼2012-09-14 12:10:38
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小小技术官

木虫 (正式写手)
★
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有影响，若不是关键的氨基酸还是可以的。制备抗体的时候，主要依靠抗原表位的免疫原性来刺激产生针对该表位的抗体。但是如果测序不正确，肯定会影响你SCI的影响因子的。
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4楼2012-09-14 13:18:24
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