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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met
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fool135

银虫 (小有名气)

[求助] 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met

原核表达时，翻译是从多克隆位点处第一个酶切位点开始翻译么?
基因N末端的酶切位点也被翻译吧，能表达整个蛋白不加入额外的氨基酸么？
不想要第一个氨基酸met是不是构建时去掉ATG序列就行？
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罗罗
1楼 2012-09-12 09:07:28
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fool135: 金币+10, ★★★很有帮助, 解答很好 2012-09-30 09:27:18
1）从第一个ATG开始翻译；2）酶切位点在启动子序列后面，当然被翻译，若在外面则不翻译，若翻译，可加入蛋白酶切去除；3）第一个ATG启动，不翻译MET，SO---------
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fool135
2楼2012-09-12 10:41:58
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fool135

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 10:41:58
1）从第一个ATG开始翻译；2）酶切位点在启动子序列后面，当然被翻译，若在外面则不翻译，若翻译，可加入蛋白酶切去除；3）第一个ATG启动，不翻译MET，SO---------

我想在N末端加一个短肽标签，不引入其他氨基酸。是不是通常的方法行不通？
酶切和内涵肽的方法我查过，但没具体做过，酶切的酶贵么，通常用哪里的酶，好操作不?
这个ATG一般在多克隆位点的前边吧，因为不加ATG蛋白通常也能表达。
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罗罗
3楼2012-09-12 11:56:18
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-12 16:07:00
直接加就行了，加了标签就是额外增加了，不需要其它的，不加就是了。2）查文献，生物论坛中有很多这样的交流。3）不加是能表达，但是前面肯定有启动子，从哪启动从哪开始表达。
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4楼2012-09-12 13:57:37
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fool135

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 13:57:37
直接加就行了，加了标签就是额外增加了，不需要其它的，不加就是了。2）查文献，生物论坛中有很多这样的交流。3）不加是能表达，但是前面肯定有启动子，从哪启动从哪开始表达。

是不是如果我想在N端非常准确的加个小肽标签（如GGG），普通做法行不通。
必须构建：限制酶切位点+蛋白酶切位点（Factor Xa，或Enterokinase）+小肽标签+目的基因
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罗罗
5楼2012-09-12 14:49:54
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-13 14:35:00
不是，直接加入就可以了，具体找遍文献，可以分析下别人加的。如：你只需要加入小肽及你目的蛋的，可构建：限制酶切位点+小肽标签+目的基因
，如果你想在蛋白里剪掉不要的多肽，或者你的小肽，才在小肽与目的蛋白间加酶切位点。
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6楼2012-09-13 13:37:05
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fool135

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junminh at 2012-09-13 13:37:05
不是，直接加入就可以了，具体找遍文献，可以分析下别人加的。如：你只需要加入小肽及你目的蛋的，可构建：限制酶切位点+小肽标签+目的基因
，如果你想在蛋白里剪掉不要的多肽，或者你的小肽，才在小肽与目的蛋白间 ...

我又仔细看了载体图谱，明白了。非常感谢你的解答。
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罗罗
7楼2012-09-13 15:51:11
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fool135 at 2012-09-13 15:51:11
我又仔细看了载体图谱，明白了。非常感谢你的解答。...

SUMO标签加上后再切除不会残留氨基酸。
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静心做事。
8楼2012-09-13 16:08:49
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070166017
9楼2012-09-14 21:44:44
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rockyss

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加小肽可以直接加的，只要考虑一下菌种表达问题，选择对应的遗传密码子就可以
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10楼2012-09-15 02:46:32
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