应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met
101/1返回列表
查看: 2543  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fool135

银虫 (小有名气)

[求助] 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met

原核表达时，翻译是从多克隆位点处第一个酶切位点开始翻译么?
基因N末端的酶切位点也被翻译吧，能表达整个蛋白不加入额外的氨基酸么？
不想要第一个氨基酸met是不是构建时去掉ATG序列就行？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
罗罗
1楼 2012-09-12 09:07:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fool135: 金币+10, ★★★很有帮助, 解答很好 2012-09-30 09:27:18
1）从第一个ATG开始翻译；2）酶切位点在启动子序列后面，当然被翻译，若在外面则不翻译，若翻译，可加入蛋白酶切去除；3）第一个ATG启动，不翻译MET，SO---------
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

fool135
2楼2012-09-12 10:41:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fool135

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 10:41:58
1）从第一个ATG开始翻译；2）酶切位点在启动子序列后面，当然被翻译，若在外面则不翻译，若翻译，可加入蛋白酶切去除；3）第一个ATG启动，不翻译MET，SO---------

我想在N末端加一个短肽标签，不引入其他氨基酸。是不是通常的方法行不通？
酶切和内涵肽的方法我查过，但没具体做过，酶切的酶贵么，通常用哪里的酶，好操作不?
这个ATG一般在多克隆位点的前边吧，因为不加ATG蛋白通常也能表达。
赞一下 回复此楼
罗罗
3楼2012-09-12 11:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-12 16:07:00
直接加就行了，加了标签就是额外增加了，不需要其它的，不加就是了。2）查文献，生物论坛中有很多这样的交流。3）不加是能表达，但是前面肯定有启动子，从哪启动从哪开始表达。
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-12 13:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fool135

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 13:57:37
直接加就行了，加了标签就是额外增加了，不需要其它的，不加就是了。2）查文献，生物论坛中有很多这样的交流。3）不加是能表达，但是前面肯定有启动子，从哪启动从哪开始表达。

是不是如果我想在N端非常准确的加个小肽标签（如GGG），普通做法行不通。
必须构建：限制酶切位点+蛋白酶切位点（Factor Xa，或Enterokinase）+小肽标签+目的基因
赞一下 回复此楼
罗罗
5楼2012-09-12 14:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-13 14:35:00
不是，直接加入就可以了，具体找遍文献，可以分析下别人加的。如：你只需要加入小肽及你目的蛋的，可构建：限制酶切位点+小肽标签+目的基因
，如果你想在蛋白里剪掉不要的多肽，或者你的小肽，才在小肽与目的蛋白间加酶切位点。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-13 13:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fool135

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junminh at 2012-09-13 13:37:05
不是，直接加入就可以了，具体找遍文献，可以分析下别人加的。如：你只需要加入小肽及你目的蛋的，可构建：限制酶切位点+小肽标签+目的基因
，如果你想在蛋白里剪掉不要的多肽，或者你的小肽，才在小肽与目的蛋白间 ...

我又仔细看了载体图谱，明白了。非常感谢你的解答。
赞一下 回复此楼
罗罗
7楼2012-09-13 15:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fool135 at 2012-09-13 15:51:11
我又仔细看了载体图谱，明白了。非常感谢你的解答。...

SUMO标签加上后再切除不会残留氨基酸。
赞一下 回复此楼
静心做事。
8楼2012-09-13 16:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070166017
9楼2012-09-14 21:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rockyss

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加小肽可以直接加的，只要考虑一下菌种表达问题，选择对应的遗传密码子就可以
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-15 02:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fool135 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 310求调剂 +16 666真好 2026-04-11 18/900 2026-04-15 13:28 by 黑科技矿业
[考研] 求调剂学校 +13 不会吃肉 2026-04-13 15/750 2026-04-15 12:49 by 西北望—风沙
[考研] 药学求调剂 +10 RussHu 2026-04-12 12/600 2026-04-15 12:02 by zhping515
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 恳请有学校收留 +3 柯淮然 2026-04-12 3/150 2026-04-14 16:25 by 逆水乘风
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭