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fool135

银虫 (小有名气)

[求助] 如何蛋白原核表达,并去掉第一个氨基酸met

原核表达时,翻译是从多克隆位点处第一个酶切位点开始翻译么?
基因N末端的酶切位点也被翻译吧,能表达整个蛋白不加入额外的氨基酸么?
不想要第一个氨基酸met是不是构建时去掉ATG序列就行?
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罗罗
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-12 16:07:00
直接加就行了,加了标签就是额外增加了,不需要其它的,不加就是了。2)查文献,生物论坛中有很多这样的交流。3)不加是能表达,但是前面肯定有启动子,从哪启动从哪开始表达。
4楼2012-09-12 13:57:37
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fool135: 金币+10, ★★★很有帮助, 解答很好 2012-09-30 09:27:18
1)从第一个ATG开始翻译;2)酶切位点在启动子序列后面,当然被翻译,若在外面则不翻译,若翻译,可加入蛋白酶切去除;3)第一个ATG启动,不翻译MET,SO---------

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-09-12 10:41:58
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fool135

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 10:41:58
1)从第一个ATG开始翻译;2)酶切位点在启动子序列后面,当然被翻译,若在外面则不翻译,若翻译,可加入蛋白酶切去除;3)第一个ATG启动,不翻译MET,SO---------

我想在N末端加一个短肽标签,不引入其他氨基酸。是不是通常的方法行不通?
酶切和内涵肽的方法我查过,但没具体做过,酶切的酶贵么,通常用哪里的酶,好操作不?
这个ATG一般在多克隆位点的前边吧,因为不加ATG蛋白通常也能表达。
罗罗
3楼2012-09-12 11:56:18
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fool135

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by junminh at 2012-09-12 13:57:37
直接加就行了,加了标签就是额外增加了,不需要其它的,不加就是了。2)查文献,生物论坛中有很多这样的交流。3)不加是能表达,但是前面肯定有启动子,从哪启动从哪开始表达。

是不是如果我想在N端非常准确的加个小肽标签(如GGG),普通做法行不通。
必须构建:限制酶切位点+蛋白酶切位点(Factor Xa,或Enterokinase)+小肽标签+目的基因
罗罗
5楼2012-09-12 14:49:54
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