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flychess

铜虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理 已有2人参与

请教牛人:Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理,在操作时为什么要分别在缓冲盐和纯水中进行,为什么要加入葡聚糖2000?书上的原理都说的很笼统,能详细点吗?最近刚接触,发现很多都不懂。
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netscaner

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 09:10:08
Sephadex是分子排阻原理,不同分子量的分子在一定孔径的葡聚糖凝胶里保留的时间不一样。
天道酬勤!
2楼2012-09-06 08:39:42
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:16
主要是根据分子排阻法来进行的。主要是根据硅胶间的空隙及硅胶内的空隙进行分离的。硅胶间的缝隙较大而硅胶内的缝隙较小,因此大分子(聚合物)的东西不会进入硅胶内的缝隙,因此出峰较快;而小分子(单体)的东西则相反。
3楼2012-09-06 09:05:31
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hhw_123

金虫 (正式写手)

不好意思,习惯了。把凝胶说成硅胶了。特此更正!
4楼2012-09-06 09:08:02
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:23
分子筛孔机理,小分子能进入筛孔,走得慢,大分子在筛孔外游走,走得快。
归零
5楼2012-09-06 15:41:17
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SAI_光

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:29
加入蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积,测定的原理楼长的兄弟们已经说了就是分子排阻原理 建议LZ找相关的书籍看一下,凝胶排阻在日常的运用中很多,凝胶的损失很小 是很理想分离方法 祝好
6楼2012-09-06 18:57:17
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flychess

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by SAI_光 at 2012-09-06 18:57:17
加入蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积,测定的原理楼长的兄弟们已经说了就是分子排阻原理 建议LZ找相关的书籍看一下,凝胶排阻在日常的运用中很多,凝胶的损失很小 是很理想分离方法 祝好

恩,谢谢,基本原理我知道,就是不明白为什么要在两相中测定,蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积,这个我还是比较困惑啊,一般蓝色葡聚糖2000既要在缓冲盐又要在水相中测定,药典上规定它在两种流动相中的出峰时间比值应在0.93~1.07间,why?
7楼2012-09-07 21:55:52
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bear创

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

凝胶色谱分析方法的原理   
    在Sephadex G-10凝胶色谱系统中,由于Sephadex G-10的排阻分子量仅为700d,因此,除部分寡聚物外,β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留;即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰,其Kav=0。在特定条件下,β-内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用等次级相互作用,可以形成缔合物,导致其表观分子量增大;此时在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为,即在Kav=0处表现为单一的色谱峰。利用此原理,在Sephadex G-10凝胶色谱系统中,以药物自身为对照品,测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标;再改变色谱条件,测定样品中的高分子杂质和药物分离后在Kav=0处的峰响应指标;按外标法计算,即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。
伊森说我的精神分裂症痊愈了,我和我都挺好的
8楼2014-03-20 09:37:11
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如猫似狗

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼上说的不错。
至于蓝色葡聚糖2000作用:是考察系统适用性,n,拖尾,保留时间重复性、R。什么测外水,我不觉得。它就是状态、分子量固定,不随流动相变化的组分。两种流动相保留基本一致。
9楼2014-03-20 16:54:03
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