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flychess

铜虫 (初入文坛)

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[求助] Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理已有2人参与

请教牛人：Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理，在操作时为什么要分别在缓冲盐和纯水中进行，为什么要加入葡聚糖2000？书上的原理都说的很笼统，能详细点吗？最近刚接触，发现很多都不懂。

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1楼 2012-09-05 20:23:35

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bear创

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

凝胶色谱分析方法的原理
在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，由于Sephadex G-10的排阻分子量仅为700d，因此，除部分寡聚物外，β－内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留；即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，其Kav＝0。在特定条件下，β－内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用等次级相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大；此时在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为，即在Kav＝0处表现为单一的色谱峰。利用此原理，在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物分离后在Kav＝0处的峰响应指标；按外标法计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。