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Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理 已有2人参与
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| 请教牛人:Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理,在操作时为什么要分别在缓冲盐和纯水中进行,为什么要加入葡聚糖2000?书上的原理都说的很笼统,能详细点吗?最近刚接触,发现很多都不懂。 |
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【答案】应助回帖
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凝胶色谱分析方法的原理 在Sephadex G-10凝胶色谱系统中,由于Sephadex G-10的排阻分子量仅为700d,因此,除部分寡聚物外,β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留;即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰,其Kav=0。在特定条件下,β-内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用等次级相互作用,可以形成缔合物,导致其表观分子量增大;此时在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为,即在Kav=0处表现为单一的色谱峰。利用此原理,在Sephadex G-10凝胶色谱系统中,以药物自身为对照品,测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标;再改变色谱条件,测定样品中的高分子杂质和药物分离后在Kav=0处的峰响应指标;按外标法计算,即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。 |

8楼2014-03-20 09:37:11
netscaner
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2楼2012-09-06 08:39:42
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