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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理
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flychess

铜虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理 已有2人参与

请教牛人：Sephadex凝胶色谱法测定青霉素类高分子杂质的机理，在操作时为什么要分别在缓冲盐和纯水中进行，为什么要加入葡聚糖2000？书上的原理都说的很笼统，能详细点吗？最近刚接触，发现很多都不懂。
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1楼 2012-09-05 20:23:35
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netscaner

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 09:10:08
Sephadex是分子排阻原理，不同分子量的分子在一定孔径的葡聚糖凝胶里保留的时间不一样。
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天道酬勤！
2楼2012-09-06 08:39:42
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:16
主要是根据分子排阻法来进行的。主要是根据硅胶间的空隙及硅胶内的空隙进行分离的。硅胶间的缝隙较大而硅胶内的缝隙较小，因此大分子（聚合物）的东西不会进入硅胶内的缝隙，因此出峰较快；而小分子（单体）的东西则相反。
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3楼2012-09-06 09:05:31
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hhw_123

金虫 (正式写手)
不好意思，习惯了。把凝胶说成硅胶了。特此更正！
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4楼2012-09-06 09:08:02
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:23
分子筛孔机理，小分子能进入筛孔，走得慢，大分子在筛孔外游走，走得快。
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归零
5楼2012-09-06 15:41:17
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SAI_光

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-06 19:08:29
加入蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积，测定的原理楼长的兄弟们已经说了就是分子排阻原理 建议LZ找相关的书籍看一下，凝胶排阻在日常的运用中很多，凝胶的损失很小 是很理想分离方法 祝好
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6楼2012-09-06 18:57:17
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flychess

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by SAI_光 at 2012-09-06 18:57:17
加入蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积，测定的原理楼长的兄弟们已经说了就是分子排阻原理 建议LZ找相关的书籍看一下，凝胶排阻在日常的运用中很多，凝胶的损失很小 是很理想分离方法 祝好

恩，谢谢，基本原理我知道，就是不明白为什么要在两相中测定，蓝色葡聚糖2000是为了测定外水体积，这个我还是比较困惑啊，一般蓝色葡聚糖2000既要在缓冲盐又要在水相中测定，药典上规定它在两种流动相中的出峰时间比值应在0.93~1.07间，why?
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7楼2012-09-07 21:55:52
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bear创

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

凝胶色谱分析方法的原理   
    在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，由于Sephadex G-10的排阻分子量仅为700d，因此，除部分寡聚物外，β－内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留；即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，其Kav＝0。在特定条件下，β－内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用等次级相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大；此时在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为，即在Kav＝0处表现为单一的色谱峰。利用此原理，在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和药物分离后在Kav＝0处的峰响应指标；按外标法计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。
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伊森说我的精神分裂症痊愈了，我和我都挺好的
8楼2014-03-20 09:37:11
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如猫似狗

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼上说的不错。
至于蓝色葡聚糖2000作用：是考察系统适用性，n，拖尾，保留时间重复性、R。什么测外水，我不觉得。它就是状态、分子量固定，不随流动相变化的组分。两种流动相保留基本一致。
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9楼2014-03-20 16:54:03
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