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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么去掉质粒中的RNA
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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

[求助] 怎么去掉质粒中的RNA

最近做了一次大量纯化质粒，溶液1中加了1mg/ml的RNA酶，反应大概半个小时，但是电泳图上有一条明显的RNA带，请问该如何去除呀？下面是琼脂糖电泳图，目的条带大小9000bp

Xu lab 2012-09-05 16 小时 34 分钟.jpg
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1楼 2012-09-05 16:48:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

skmlz87

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-09-05 17:05:50
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skmlz87

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2012-09-05 17:07:03
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普通回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用ＲＮＡ酶消化下，过Ｑ除掉就行
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2楼2012-09-05 16:56:29
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我怎么觉得你的那个不像是RNA啊？估计你电泳时间不会太短吧，RNA应该跑出去了啊。
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持之以恒、永不放弃！
5楼2012-09-05 17:17:53
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小小微生物

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by skmlz87 at 2012-09-05 17:07:03
还有你的胶上怎么有红色的东西，是EB没有摇匀吗？

那是geneshow染色的，不是EB
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6楼2012-09-05 19:06:01
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wind-he

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肉眼观察，确实不像RNA。。 在溶液1中加RNase A 效果不如纯化完了再加RNase A消化。 当然如果要求特别高的话，还要纯化再除掉RNA酶了
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7楼2012-09-06 11:12:23
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-06 13:52:08
你可以将目的条带切胶，再用回收试剂盒纯化回收，不过最好还是在最后加RNA酶，消化一段时间即可，看你的图下边的条带不像是RNA，如果是只要RNase A有效就会全部消化的，你还可以检验一下RNA酶是否失活。
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没有做不到，只有想不到！
8楼2012-09-06 12:09:29
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dxli1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA酶可能失活了，你可以在最后一步加水（我一般不加TE）前加入RNA酶试一下，一般RNA都是拖尾的，有可能不是RNA，是其他的片段，这是你酶切后的产物吗，单切还是双切呢？
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逆水行舟，不进则退。
9楼2012-09-06 23:28:47
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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-09-05 16:56:29
用ＲＮＡ酶消化下，过Ｑ除掉就行

这是用RNA酶消化过了，然后又过了Q柱的结果
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10楼2012-09-07 10:00:13
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