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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

[求助] 怎么去掉质粒中的RNA

最近做了一次大量纯化质粒,溶液1中加了1mg/ml的RNA酶,反应大概半个小时,但是电泳图上有一条明显的RNA带,请问该如何去除呀?下面是琼脂糖电泳图,目的条带大小9000bp

Xu lab 2012-09-05 16 小时 34 分钟.jpg
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skmlz87

禁虫 (初入文坛)

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本帖内容被屏蔽

3楼2012-09-05 17:05:50
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skmlz87

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

4楼2012-09-05 17:07:03
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普通回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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用RNA酶消化下,过Q除掉就行
2楼2012-09-05 16:56:29
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我怎么觉得你的那个不像是RNA啊?估计你电泳时间不会太短吧,RNA应该跑出去了啊。
持之以恒、永不放弃!
5楼2012-09-05 17:17:53
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小小微生物

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by skmlz87 at 2012-09-05 17:07:03
还有你的胶上怎么有红色的东西,是EB没有摇匀吗?

那是geneshow染色的,不是EB
6楼2012-09-05 19:06:01
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wind-he

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
肉眼观察,确实不像RNA。。 在溶液1中加RNase A 效果不如纯化完了再加RNase A消化。 当然如果要求特别高的话,还要纯化再除掉RNA酶了
7楼2012-09-06 11:12:23
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-06 13:52:08
你可以将目的条带切胶,再用回收试剂盒纯化回收,不过最好还是在最后加RNA酶,消化一段时间即可,看你的图下边的条带不像是RNA,如果是只要RNase A有效就会全部消化的,你还可以检验一下RNA酶是否失活。
没有做不到,只有想不到!
8楼2012-09-06 12:09:29
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dxli1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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RNA酶可能失活了,你可以在最后一步加水(我一般不加TE)前加入RNA酶试一下,一般RNA都是拖尾的,有可能不是RNA,是其他的片段,这是你酶切后的产物吗,单切还是双切呢?
逆水行舟,不进则退。
9楼2012-09-06 23:28:47
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Claire_Liu

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-09-05 16:56:29
用RNA酶消化下,过Q除掉就行

这是用RNA酶消化过了,然后又过了Q柱的结果
10楼2012-09-07 10:00:13
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