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2008116068

木虫 (著名写手)

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虫号: 701164

[交流] 革兰氏阳性菌接合出问题了

大家好！
我做的是多粘芽孢杆菌，由于电转化操作比较困难，所以选择接合的方式来进行基因操作。
我构建一个载体：只能在阴性菌中复制，但是加了一个oriT片段，和多粘芽孢杆菌的一个基因同源片段。然后将质粒导入E.coli S17-1中，通过接合，挑选阳性转化子。
目前的结果是，有转化子，但还没挑到阳性的。

请问问题出在哪里？
是不是单有一个oriT是不能进行接合反应啊？（首先可以肯定该菌可以进行接合反应）
O(∩_∩)O谢谢

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1楼 2012-08-31 16:51:01

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2008116068

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

4楼: Originally posted by syn1985 at 2012-09-03 12:32:26
你是说用抗生素筛选的时候长然后再点到抗生素平板上就不长了是吧我也遇到过这种情况应该是抗生素覆的不均匀所以我就一次挑好多个一起转接到液体培养基（加抗生素）让他长挑那么多总有一个是长的

好的，谢谢你的建议，我试试