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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 革兰氏阳性菌接合 出问题了
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2008116068

木虫 (著名写手)

[交流] 革兰氏阳性菌接合 出问题了

大家好！
我做的是多粘芽孢杆菌，由于电转化操作比较困难，所以选择接合的方式来进行基因操作。
我构建一个载体：只能在阴性菌中复制，但是加了一个oriT片段，和多粘芽孢杆菌的一个基因同源片段。然后将质粒导入E.coli S17-1中，通过接合，挑选阳性转化子。
目前的结果是，有转化子，但还没挑到阳性的。

请问问题出在哪里？
是不是单有一个oriT是不能进行接合反应啊？（首先可以肯定该菌可以进行接合反应）
O(∩_∩)O谢谢
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1楼 2012-08-31 16:51:01
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syn1985

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
scelab: 金币+2, 谢谢热心交流~ :) 2012-09-01 17:49:32
2008116068: 金币+1 2012-09-02 20:01:59
你没用抗生素做筛选吗？一般长出来的都是接合进去了啊
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2楼2012-09-01 17:36:27
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2008116068

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by syn1985 at 2012-09-01 17:36:27
你没用抗生素做筛选吗？一般长出来的都是接合进去了啊

用抗生素复筛就不长了
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3楼2012-09-02 20:01:38
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syn1985

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2008116068: 金币+1 2012-09-03 18:18:01
你是说用抗生素筛选的时候长 然后再点到抗生素平板上就不长了是吧 我也遇到过 这种情况应该是抗生素覆的不均匀 所以我就一次挑好多个一起转接到液体培养基（加抗生素）让他长 挑那么多 总有一个是长的
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4楼2012-09-03 12:32:26
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2008116068

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by syn1985 at 2012-09-03 12:32:26
你是说用抗生素筛选的时候长 然后再点到抗生素平板上就不长了是吧 我也遇到过 这种情况应该是抗生素覆的不均匀 所以我就一次挑好多个一起转接到液体培养基（加抗生素）让他长 挑那么多 总有一个是长的

好的，谢谢你的建议，我试试
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5楼2012-09-03 18:17:57
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