[交流] 肝微粒体体外实验操作细节（新手求教）

本人第一次做体外肝微粒体代谢实验，做药物代谢，用LC-MS/MS测，但是具体细节不知从何入手，希望各位高手不吝赐教！
我是从BD直接购买的肝微粒体成品和NADPH还原系统，不知道微粒体到了之后该怎么样保存，如何解冻？操作要在什么样的器皿里进行呢？需要无菌操作或者有什么特殊要求么？反应15min够吗？反应时间是怎么确定的呢？
整个实验过程操作上有没有什么要求，因从来没做过，真是如何下手操作，先谢过各位高手了！

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1楼 2012-08-30 15:26:17

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西风瘦

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引用回帖:

4楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-08-30 23:52:53
你需要看文献
一般的操作是微粒体蛋白 0.1mg/ml （需优化） tris-盐酸缓冲液
加入反应的药物如果是做动力学的话需要不同浓度的药物 DMSO溶解的话保证终体积小于1% 然后加入NADPH起始孵育时间蛋白浓度需要 ...

我后面要用LC-MS/MS检测，我查到好像是不能用tris做缓冲液吧？PBS里有大量的钠盐，是不是也不太合适？用什么比较好呢？