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汕头大学海洋科学接受调剂
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转化大肠杆菌后,涂板为什么都是模糊不清的菌?

在三四个月前,用的takara的大肠杆菌感受态做转化,涂板后生长比较模糊,只有周围几个点是单克隆,后来觉得是amp的质量,就新买了amp,涂板后得到了单克隆,而且清楚。takara的感受态用完后就换了个小牌子的感受态,涂板后就生长比较模糊了,但是蓝白斑筛选大体还是有区别的,模糊的地方有的是蓝色的,所谓的模糊就像是玻璃有泥,用脏布擦了擦,那种感觉。开始以为这种小牌的感受态浓度太大了,稀释后涂板,结果和不稀释差不多。请问,这种生长模糊,基本没有单克隆菌落是什么原因?是感受态的问题还是amp的问题,还是我实验操作的问题?
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-23 21:44:19
楼主所说的情况我也遇到过,我用的是TOP10,可能的原因是AMP失效或浓度不够,培养时间可能过长,涂板时太湿。现在我采取的方案是配好AMP板子后基本两星期用掉,接菌涂板前在超净台吹一会,让板子干一点,同时培养时 ...

我是在涂板前晾干的,涂板时一点都不湿,涂上去就干了,以前用takara感受态时候浓度也是这样的,不知道是不是amp失效了,自己觉得应该不会失效的,刚配的啊,amp也是今年刚买的。培养时间差不多也是14小时,我再试试吧
5楼2012-08-28 16:02:39
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普通回帖

wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

这次实验还做了没连接直接涂感受态,结果也是生长模糊,是不是amp的问题?
2楼2012-08-23 15:06:21
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题,你提高一下筛选标记的抗生素浓度试试
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-08-23 21:28:35
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-24 13:44:06
wangxiao9253: 金币+2, 有帮助 2012-09-01 10:37:16
楼主所说的情况我也遇到过,我用的是TOP10,可能的原因是AMP失效或浓度不够,培养时间可能过长,涂板时太湿。现在我采取的方案是配好AMP板子后基本两星期用掉,接菌涂板前在超净台吹一会,让板子干一点,同时培养时间不超过14小时,基本上就不大出问题了。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-08-23 21:44:19
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wangxiao9253: 金币+2 2012-09-01 10:37:27
转化效率太高了,菌太多了吧。
可以少涂一点试试。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
6楼2012-08-28 16:16:41
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-30 14:22:04
wangxiao9253: 金币+1 2012-09-01 10:38:03
请问是板上有块类似膜状的结果吗?
那可能是抗生素失效了
希望对你有帮助
7楼2012-08-28 21:39:03
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 84146922 at 2012-08-28 21:39:03
请问是板上有块类似膜状的结果吗?
那可能是抗生素失效了
希望对你有帮助

不是块状的,就是一层,一片那种的,像擦玻璃擦不干净那种,我已经买了新感受态,过两天试试看结果怎么样
8楼2012-08-29 15:53:34
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-30 14:22:19
平板太湿了,我们实验室最开始的时候就老上这个当。后来发现问题了,是因为每次都是平板倒完就立马用,上面水分太多了。
所以往后都是提前8-12个小时准备好平板,置于37度放置烘干。这样涂出来效果非常清晰
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
9楼2012-08-29 17:07:46
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木小默

铁虫 (小有名气)

我不知道你这怎么回事  我说说我的经验吧  就是涂完板之后  把平板放在37摄氏度的烘箱中放置20分钟  然后再翻过来
10楼2012-08-29 20:55:23
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