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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化大肠杆菌后，涂板为什么都是模糊不清的菌？
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转化大肠杆菌后，涂板为什么都是模糊不清的菌？

在三四个月前，用的takara的大肠杆菌感受态做转化，涂板后生长比较模糊，只有周围几个点是单克隆，后来觉得是amp的质量，就新买了amp，涂板后得到了单克隆，而且清楚。takara的感受态用完后就换了个小牌子的感受态，涂板后就生长比较模糊了，但是蓝白斑筛选大体还是有区别的，模糊的地方有的是蓝色的，所谓的模糊就像是玻璃有泥，用脏布擦了擦，那种感觉。开始以为这种小牌的感受态浓度太大了，稀释后涂板，结果和不稀释差不多。请问，这种生长模糊，基本没有单克隆菌落是什么原因?是感受态的问题还是amp的问题，还是我实验操作的问题？
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1楼 2012-08-23 14:56:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-23 21:44:19
楼主所说的情况我也遇到过，我用的是TOP10，可能的原因是AMP失效或浓度不够，培养时间可能过长，涂板时太湿。现在我采取的方案是配好AMP板子后基本两星期用掉，接菌涂板前在超净台吹一会，让板子干一点，同时培养时 ...

我是在涂板前晾干的，涂板时一点都不湿，涂上去就干了，以前用takara感受态时候浓度也是这样的，不知道是不是amp失效了，自己觉得应该不会失效的，刚配的啊，amp也是今年刚买的。培养时间差不多也是14小时，我再试试吧
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5楼2012-08-28 16:02:39
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普通回帖

wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)
这次实验还做了没连接直接涂感受态，结果也是生长模糊，是不是amp的问题？
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2楼2012-08-23 15:06:21
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题，你提高一下筛选标记的抗生素浓度试试
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-08-23 21:28:35
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-24 13:44:06
wangxiao9253: 金币+2, ★有帮助 2012-09-01 10:37:16
楼主所说的情况我也遇到过，我用的是TOP10，可能的原因是AMP失效或浓度不够，培养时间可能过长，涂板时太湿。现在我采取的方案是配好AMP板子后基本两星期用掉，接菌涂板前在超净台吹一会，让板子干一点，同时培养时间不超过14小时，基本上就不大出问题了。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-08-23 21:44:19
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wangxiao9253: 金币+2 2012-09-01 10:37:27
转化效率太高了，菌太多了吧。
可以少涂一点试试。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
6楼2012-08-28 16:16:41
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-30 14:22:04
wangxiao9253: 金币+1 2012-09-01 10:38:03
请问是板上有块类似膜状的结果吗？
那可能是抗生素失效了
希望对你有帮助
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7楼2012-08-28 21:39:03
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 84146922 at 2012-08-28 21:39:03
请问是板上有块类似膜状的结果吗？
那可能是抗生素失效了
希望对你有帮助

不是块状的，就是一层，一片那种的，像擦玻璃擦不干净那种，我已经买了新感受态，过两天试试看结果怎么样
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8楼2012-08-29 15:53:34
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-30 14:22:19
平板太湿了，我们实验室最开始的时候就老上这个当。后来发现问题了，是因为每次都是平板倒完就立马用，上面水分太多了。
所以往后都是提前8-12个小时准备好平板，置于37度放置烘干。这样涂出来效果非常清晰
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
9楼2012-08-29 17:07:46
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木小默

铁虫 (小有名气)
我不知道你这怎么回事  我说说我的经验吧  就是涂完板之后  把平板放在37摄氏度的烘箱中放置20分钟  然后再翻过来
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10楼2012-08-29 20:55:23
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