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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化大肠杆菌后，涂板为什么都是模糊不清的菌？
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)
我已经换了另外一种感受态，而且在已经做好的amp平板上加了2mg的amp液体涂抹到培养基表面，这次的过了一夜后amp的平板长出了单克隆，基本可以认为是我的感受态的问题，还有就是我的x-gal和iptg可能失效了，没有蓝斑出现
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11楼2012-09-01 10:31:38
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-01 15:45:21
这个不一定是抗生素的原因。但是我要提醒一下LZ，抗生素虽然是新买的，但是在往培养基中添加的时候如果培养基的温度过高也会让抗生素部分失活的。添加抗生素时培养基的温度在55-60℃比较好。温度过高会让抗生素失活，温度过低时琼脂开始凝结，不利于抗生素的混匀，导致局部抗生素浓度过高或者过低。而且抗生素不能用紫外线照射。
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12楼2012-09-01 11:29:36
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匿名

用户注销 (正式写手)
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13楼2012-09-03 10:41:41
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atai5793

新虫 (初入文坛)
觉得 一层的话 可能就是没转进去 全是死菌
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14楼2012-09-03 12:19:37
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gjs713 at 2012-08-29 17:07:46
平板太湿了，我们实验室最开始的时候就老上这个当。后来发现问题了，是因为每次都是平板倒完就立马用，上面水分太多了。
所以往后都是提前8-12个小时准备好平板，置于37度放置烘干。这样涂出来效果非常清晰

我也遇到这个问题了，上次做就没有这个问题，这次连做了三批都是这样，我还奇怪呢，怎么会这样的，那我按照您的建议做一下，先配好培养基，放一天再用，是放在常温下，还是放在4℃冰箱里啊？
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如果不努力，肯定没收获！
15楼2012-11-13 09:56:29
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zhoumin1108

铁虫 (小有名气)
涂平斑的时候涂得太久了,稍微涂开就行.
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16楼2012-11-13 10:25:59
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-13 09:56:29
我也遇到这个问题了，上次做就没有这个问题，这次连做了三批都是这样，我还奇怪呢，怎么会这样的，那我按照您的建议做一下，先配好培养基，放一天再用，是放在常温下，还是放在4℃冰箱里啊？...

不能放4℃。尽量放在37℃的培养箱吧
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
17楼2012-11-13 22:28:42
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by gjs713 at 2012-11-13 22:28:42
不能放4℃。尽量放在37℃的培养箱吧...

Amp和IPTG、X-Gal 应该怎么加呢？我都是在倒板之前把抗生素都加进去，有的是倒板前只加AMP，剩下的两种在凃板之前凃在培养基上，应该在怎么做呢？
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如果不努力，肯定没收获！
18楼2012-11-14 08:03:09
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 08:03:09
Amp和IPTG、X-Gal 应该怎么加呢？我都是在倒板之前把抗生素都加进去，有的是倒板前只加AMP，剩下的两种在凃板之前凃在培养基上，应该在怎么做呢？...

呵呵 基本上是这样的。  只是我们做的时候 IPTG和X-Gal 是跟菌液混在一块涂的  效果挺好。还省事。
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
19楼2012-11-14 18:13:53
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
不知什么抗性？
如果是Amp的话，容易失效，尽量用新倒的平板。此外，是不是涂得量太多了？
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20楼2013-03-01 17:11:24
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