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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转化大肠杆菌后,涂板为什么都是模糊不清的菌?

在三四个月前,用的takara的大肠杆菌感受态做转化,涂板后生长比较模糊,只有周围几个点是单克隆,后来觉得是amp的质量,就新买了amp,涂板后得到了单克隆,而且清楚。takara的感受态用完后就换了个小牌子的感受态,涂板后就生长比较模糊了,但是蓝白斑筛选大体还是有区别的,模糊的地方有的是蓝色的,所谓的模糊就像是玻璃有泥,用脏布擦了擦,那种感觉。开始以为这种小牌的感受态浓度太大了,稀释后涂板,结果和不稀释差不多。请问,这种生长模糊,基本没有单克隆菌落是什么原因?是感受态的问题还是amp的问题,还是我实验操作的问题?
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-11-14 08:03:09
Amp和IPTG、X-Gal 应该怎么加呢?我都是在倒板之前把抗生素都加进去,有的是倒板前只加AMP,剩下的两种在凃板之前凃在培养基上,应该在怎么做呢?...

呵呵 基本上是这样的。  只是我们做的时候 IPTG和X-Gal 是跟菌液混在一块涂的  效果挺好。还省事。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
19楼2012-11-14 18:13:53
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wangxiao9253

铜虫 (初入文坛)

这次实验还做了没连接直接涂感受态,结果也是生长模糊,是不是amp的问题?
2楼2012-08-23 15:06:21
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题,你提高一下筛选标记的抗生素浓度试试
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-08-23 21:28:35
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-24 13:44:06
wangxiao9253: 金币+2, 有帮助 2012-09-01 10:37:16
楼主所说的情况我也遇到过,我用的是TOP10,可能的原因是AMP失效或浓度不够,培养时间可能过长,涂板时太湿。现在我采取的方案是配好AMP板子后基本两星期用掉,接菌涂板前在超净台吹一会,让板子干一点,同时培养时间不超过14小时,基本上就不大出问题了。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-08-23 21:44:19
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