| 查看: 2018 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
特异性Promoter引物该怎么设计啊
|
||
|
小弟想请教各位高贤大仙一个关于Promoter引物设计的问题。 我想把在某一种细胞中特异性表达的基因的Promoter扩增出来，然后连接在适当的载体上并加上标记蛋白和荧光蛋白的表达序列，使这些目的蛋白依据Promoter的特异性表达在这种细胞中。但是小弟之前没有做过Promoter引物的设计，据说涉及到5‘UTR端的长度等问题，希望各路高人指点一二，不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有146人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- 引物设计好了怎么检测它的特异性
已经有8人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物
已经有8人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助：如何设计种属特异性引物？
已经有4人回复
- 引物设计时总是发生严重错配怎么办？敬请大家指点！
已经有3人回复
3楼2012-08-23 13:07:56
tiani_tan
金虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 1251.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 266
- 在线: 139小时
- 虫号: 803661
- 注册: 2009-07-05
- 性别: GG
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
2楼2012-08-23 12:26:59
tiani_tan
金虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 1251.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 266
- 在线: 139小时
- 虫号: 803661
- 注册: 2009-07-05
- 性别: GG
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
张虎: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
张虎: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
|
首先，确定你的物种是否已经被报道，如果基因组已经知道的话，那么根据网上的序列设计引物，这里需要注意的是分析启动子最低片段是多少；含有顺式作用原件的区域有多长；含有增强子的序列有多少，可能最后需要获得几条大小不同的片段，需要构建几个载体，一一验证。 对于基因组未曾报道的序列，就比较复杂。就像我上文说的，需要用一些限制性内切酶将基因组酶切成小片段后，连接接头，然后利用接头上的一直序列和基因内部序列进行PCR扩增，然后测序，根据测序结果进行启动子预测，然后扩增含有不同区域的引物，验证功能。 建议还是搜集一下相关文献，我只是看过文献，实验室有人做过这方面的。但我自己没有做过。呵呵！！ |
4楼2012-08-24 09:05:24
|
你好，多谢你的回答。 我在文献上查到某个基因的promoter时这么说“Reporter gene assay: [str-1::gfp] translational fusion, with 4 kb 5'UTR of str-1 and the first 4 amino acids of the protein.” 请问4kb 5'UTR of str-1 是从str-1 的5' CDS区起始密码子往前算4kb（就是包括了5'UTR ），还是从 5'UTR之前往前算4kb（就是不包括5'UTR ）？还有，那个“the first 4 amino acids of the protein”怎么解释？ 非常感谢！ |
5楼2012-08-24 10:25:49
