| 查看: 2411 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
特异性Promoter引物该怎么设计啊
|
||
|
小弟想请教各位高贤大仙一个关于Promoter引物设计的问题。 我想把在某一种细胞中特异性表达的基因的Promoter扩增出来，然后连接在适当的载体上并加上标记蛋白和荧光蛋白的表达序列，使这些目的蛋白依据Promoter的特异性表达在这种细胞中。但是小弟之前没有做过Promoter引物的设计，据说涉及到5‘UTR端的长度等问题，希望各路高人指点一二，不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- 引物设计好了怎么检测它的特异性
已经有8人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物
已经有8人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助：如何设计种属特异性引物？
已经有4人回复
- 引物设计时总是发生严重错配怎么办？敬请大家指点！
已经有3人回复
3楼2012-08-23 13:07:56
tiani_tan
金虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 1251.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 266
- 在线: 139小时
- 虫号: 803661
- 注册: 2009-07-05
- 性别: GG
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
2楼2012-08-23 12:26:59
tiani_tan
金虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 1251.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 266
- 在线: 139小时
- 虫号: 803661
- 注册: 2009-07-05
- 性别: GG
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
张虎: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
张虎: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
|
首先，确定你的物种是否已经被报道，如果基因组已经知道的话，那么根据网上的序列设计引物，这里需要注意的是分析启动子最低片段是多少；含有顺式作用原件的区域有多长；含有增强子的序列有多少，可能最后需要获得几条大小不同的片段，需要构建几个载体，一一验证。 对于基因组未曾报道的序列，就比较复杂。就像我上文说的，需要用一些限制性内切酶将基因组酶切成小片段后，连接接头，然后利用接头上的一直序列和基因内部序列进行PCR扩增，然后测序，根据测序结果进行启动子预测，然后扩增含有不同区域的引物，验证功能。 建议还是搜集一下相关文献，我只是看过文献，实验室有人做过这方面的。但我自己没有做过。呵呵！！ |
4楼2012-08-24 09:05:24
|
你好，多谢你的回答。 我在文献上查到某个基因的promoter时这么说“Reporter gene assay: [str-1::gfp] translational fusion, with 4 kb 5'UTR of str-1 and the first 4 amino acids of the protein.” 请问4kb 5'UTR of str-1 是从str-1 的5' CDS区起始密码子往前算4kb（就是包括了5'UTR ），还是从 5'UTR之前往前算4kb（就是不包括5'UTR ）？还有，那个“the first 4 amino acids of the protein”怎么解释？ 非常感谢！ |
5楼2012-08-24 10:25:49