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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 体内代谢物的分离
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19870224dan

金虫 (小有名气)

[求助] 体内代谢物的分离

各位有经验的哥哥姐姐：
我要做体内药物代谢物的分离鉴定，检测发现代谢物很少的，大概为原形药物量的4%。
LC-MS/MS提供的信息量很有限，所以我想通过HNMR进一步确证其结构，但从LC的分离情况（尝试了很多分离条件）三个代谢物都几乎叠加在一起，如果在这种前提下如何做HNMR呢？
传统的办法是分离出纯品，再去做鉴定。那么（1）我如何得到较多的代谢物呢？体外微粒体孵育不能得到这三种代谢物，而化学合成又很不现实~~（2）那三个代谢物理化性质很接近（通过C18柱的保留行为推断，保留时间差值为0.2-0.3min），制备液相可以分离出来吗，还是柱层析呢?好迷茫啊
恳请大家指点迷津！谢绝灌水
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1楼 2012-08-21 20:42:23
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-08-22 07:39:28
19870224dan: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-08-23 10:41:46
改变色谱柱分离，或者制备出来，没有纯品是没办法做核磁的，代谢物的量很少要通过分离得到估计要做很久，还是考虑制备，酶法
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2楼2012-08-21 21:32:25
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19870224dan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wm彼岸花 at 2012-08-21 21:32:25
改变色谱柱分离，或者制备出来，没有纯品是没办法做核磁的，代谢物的量很少要通过分离得到估计要做很久，还是考虑制备，酶法

继续请教：1.我若想确定代谢物结构，是否必须做NMR，是否质谱信息+NMR信息？
2. 你说的酶法是体外孵育吗，关键是那么多种酶，选哪种呢？是不是根据代谢物的性质来选择呢呢？我在这方面一点经验都没有哎，求赐教！
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3楼2012-08-22 09:05:11
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yll120166

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
19870224dan: 金币+5, 谢谢 2012-08-23 10:41:29
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-08-23 15:38:21
药物是否很珍贵啊，不是很珍贵的药物的话，是不是可以用你研究的动物来收集，比如动物给药后收集尿液等，富集后再行分离或检测。
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水静则清，人静则灵！
4楼2012-08-22 09:41:45
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19870224dan

金虫 (小有名气)
19870224dan: 回帖置顶 2012-08-22 19:21:04
引用回帖:
4楼: Originally posted by yll120166 at 2012-08-22 09:41:45
药物是否很珍贵啊，不是很珍贵的药物的话，是不是可以用你研究的动物来收集，比如动物给药后收集尿液等，富集后再行分离或检测。

倒不珍贵，但代谢物量很少哎，所以我就在想是不是体外制备会获得多一些，但随之而来的问题是没做过体外孵育，同学研究这个药物的体外代谢尚未发现我找的东西，比较这两点我应该咋选择呢？苦恼啊
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5楼2012-08-22 10:10:53
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-08-23 15:38:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by 19870224dan at 2012-08-22 09:05:11
继续请教：1.我若想确定代谢物结构，是否必须做NMR，是否质谱信息+NMR信息？
2. 你说的酶法是体外孵育吗，关键是那么多种酶，选哪种呢？是不是根据代谢物的性质来选择呢呢？我在这方面一点经验都没有哎，求赐教！...

做核磁确认结构，有时候质谱数据可以辅助推测，但若要说服别人显得无力啊
体外温孵选酶很重要，但这方面我也不太了解
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6楼2012-08-23 14:22:16
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19870224dan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wm彼岸花 at 2012-08-23 14:22:16
做核磁确认结构，有时候质谱数据可以辅助推测，但若要说服别人显得无力啊
体外温孵选酶很重要，但这方面我也不太了解...

O(∩_∩)O好的，谢谢！
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7楼2012-08-24 14:17:04
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luodi911

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议还是多找找文献吧，可能有很多种形式的代谢产物，降解开环的，结合的，水解的，而且粪尿胆汁都测了吗？还有有没有可能被连续代谢成CO2了？
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8楼2012-08-24 15:58:24
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