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19870224dan

金虫 (小有名气)

[求助] 体内代谢物的分离

各位有经验的哥哥姐姐:
我要做体内药物代谢物的分离鉴定,检测发现代谢物很少的,大概为原形药物量的4%。
LC-MS/MS提供的信息量很有限,所以我想通过HNMR进一步确证其结构,但从LC的分离情况(尝试了很多分离条件)三个代谢物都几乎叠加在一起,如果在这种前提下如何做HNMR呢?
传统的办法是分离出纯品,再去做鉴定。那么(1)我如何得到较多的代谢物呢?体外微粒体孵育不能得到这三种代谢物,而化学合成又很不现实~~(2)那三个代谢物理化性质很接近(通过C18柱的保留行为推断,保留时间差值为0.2-0.3min),制备液相可以分离出来吗,还是柱层析呢?好迷茫啊
恳请大家指点迷津!谢绝灌水
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luodi911

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议还是多找找文献吧,可能有很多种形式的代谢产物,降解开环的,结合的,水解的,而且粪尿胆汁都测了吗?还有有没有可能被连续代谢成CO2了?
8楼2012-08-24 15:58:24
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-08-22 07:39:28
19870224dan: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-08-23 10:41:46
改变色谱柱分离,或者制备出来,没有纯品是没办法做核磁的,代谢物的量很少要通过分离得到估计要做很久,还是考虑制备,酶法
2楼2012-08-21 21:32:25
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19870224dan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wm彼岸花 at 2012-08-21 21:32:25
改变色谱柱分离,或者制备出来,没有纯品是没办法做核磁的,代谢物的量很少要通过分离得到估计要做很久,还是考虑制备,酶法

继续请教:1.我若想确定代谢物结构,是否必须做NMR,是否质谱信息+NMR信息?
2. 你说的酶法是体外孵育吗,关键是那么多种酶,选哪种呢?是不是根据代谢物的性质来选择呢呢?我在这方面一点经验都没有哎,求赐教!
3楼2012-08-22 09:05:11
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yll120166

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
19870224dan: 金币+5, 谢谢 2012-08-23 10:41:29
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-08-23 15:38:21
药物是否很珍贵啊,不是很珍贵的药物的话,是不是可以用你研究的动物来收集,比如动物给药后收集尿液等,富集后再行分离或检测。
水静则清,人静则灵!
4楼2012-08-22 09:41:45
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