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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 组氨酸标签的问题已有1人参与

亲,怎样验证组氨酸标签有没有加到目的基因上,初学者 ,求指导
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每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
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新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 14:30:29
你是用双酶切的方法去连接吗?如果是的话,就需要设计引物时候,加上酶切位点,还要加上保护碱基。...

我PCR完后,不是要拿回收产物与PMD-19T连接,然后转化大肠杆菌,重组质粒拿去测序看是不是组氨酸标签已经加上去了。所以与PMD-19T连接时候需要给引物加酶切位点吗?如果加上去的话再另外设计带有酶切位点的引物PCR,双酶切,与PPIC-9K连接转化到毕赤酵母里面。你看这个过程合适着吗?
每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
19楼2012-08-21 15:30:08
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
将连好的质粒送公司测序就可以知道是否连上标签了
2楼2012-08-19 21:10:45
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761429495

新虫 (小有名气)

谁能给我说说从目的基因开始加组氨酸标签开始一直到粗酶液的获得大体有哪些步骤啊
每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
3楼2012-08-19 21:16:32
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-19 21:16:32
谁能给我说说从目的基因开始加组氨酸标签开始一直到粗酶液的获得大体有哪些步骤啊

粗酶液是什么?我们还不知道你的基因是干嘛的呢,说详细点,不然帮不上。
4楼2012-08-20 14:31:12
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