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求救！这到底是连上还是没连上啊！【实验时间紧，望高手救我】
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做连接，RBS作为骨架，用过两种连法，在前面连过一次片段，也在后面连过一次片段， 两次都是做菌落PCR验证时很正确，但送测序后发现只有RBS！双酶切验证也发现不对。 求解释啊这是为什么啊？ 完全不知道该怎么办了啊…… 实验时间非常紧，望高手解答。 details： E.coli 菌种DH5α 所用DNA： RBS： 长度12bp 加引物后长度约250bp part编号：BBa_B0034 所在质粒：pSB1A2 质粒长度2079bp promoter RM（λ噬菌体的一种启动子） 长度82 加引物后约400 part编号：BBa_I12007 lysis：colicin A lysis protein。 长度144 加引物后长度约400 part编号：BBa_K117000 所有的part都是经过标准化过的，酶切位点前面有EcoRI XbaI 后面有SpeI PstI。PCR引 物也是标准化过的VF2，VR。 单独的三种DNA测序正确。 part可在这里查：http://partsregistry.org/cgi/partsdb/search.cgi 第一次 RBS用S P切，lysis用X P切。 第二次 RBS用E X切，pRM用E S切。 |
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