[交流] 做大肠杆菌，red同源重组基因敲入的来探讨！已有1人参与

做的red同源重组把外源基因整合到大肠染色体上，得到阳性克隆（pcr鉴定）但是page时蛋白不表达，weston时单抗检测也检测不出来，为什么

1楼 2012-08-17 21:10:37

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新虫 (初入文坛)

引用回帖:

2楼: Originally posted by huiee at 2012-08-18 04:16:55
可能假阳性啊把PCR产物去测个序
不知道你具体是这么选择的，有没有抗性基因啊
不如先做个southblot

先抗性检测，cm+抗性，然后挑取单菌落点板，长出来后做的菌落pcr检测，pcr鉴定为敲入成功（做了阴性对照），然后才把菌接入lb中摇起来，然后做的page，和weston blot，都没有表达，求助

3楼2012-08-18 16:36:30

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金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-18 15:16:56

可能假阳性啊把PCR产物去测个序
不知道你具体是这么选择的，有没有抗性基因啊
不如先做个southblot

2楼2012-08-18 04:16:55

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