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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小蕾8676

新虫 (初入文坛)


[求助] 免疫荧光实验背景深

一抗浓度用的是1:100,照相后发现背景很深,想要的地方却没有,而且用荧光显微镜可以照相,而用共聚焦时就什么都看不到了,请问这是怎么回事啊?
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极应助,解答问题 2012-08-17 17:10:11
1.背景深证明一抗或者尔康浓度太高,需要降低抗体浓度或者减少抗体孵育的时间和温度
2.想要的地方没有就证明抗体没有特异性的染上目的蛋白;
    可能原因:细胞上不表达这个蛋白
            细胞表达蛋白在细胞质或者细胞核上,染色需要透膜处理
            固定过程中发生了蛋白交联导致抗原表位被封闭导致染色失败
            一抗或者二抗是否正确
3. 荧光显微镜可以照相,而用共聚焦时就什么都看不到了:荧光显微镜的激光视光谱激光,他提供的激发光波长范围长,而共聚焦的激发光波长范围小,所以看不见很正常的,需要选择共聚焦的对应的荧光素的激发波长
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2012-08-17 16:20:46
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