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免疫荧光实验背景深
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| 一抗浓度用的是1:100，照相后发现背景很深，想要的地方却没有，而且用荧光显微镜可以照相，而用共聚焦时就什么都看不到了，请问这是怎么回事啊？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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jhu132llh
荣誉版主 (知名作家)
大洪
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极应助，解答问题 2012-08-17 17:10:11
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1.背景深证明一抗或者尔康浓度太高，需要降低抗体浓度或者减少抗体孵育的时间和温度 2.想要的地方没有就证明抗体没有特异性的染上目的蛋白； 可能原因：细胞上不表达这个蛋白 细胞表达蛋白在细胞质或者细胞核上，染色需要透膜处理 固定过程中发生了蛋白交联导致抗原表位被封闭导致染色失败 一抗或者二抗是否正确 3. 荧光显微镜可以照相，而用共聚焦时就什么都看不到了：荧光显微镜的激光视光谱激光，他提供的激发光波长范围长，而共聚焦的激发光波长范围小，所以看不见很正常的，需要选择共聚焦的对应的荧光素的激发波长 |
2楼2012-08-17 16:20:46
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