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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：一端为黏性末端一端为平末端的克隆
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 求助：一端为黏性末端一端为平末端的克隆 已有1人参与

需要做一个一端为黏性末端一端为平末端的克隆，求教下面几个问题？
1. 如果我用pfu扩增的话，那么是不是可以使用pfu扩增形成的平末端而不用加产生平末端的酶切位点？
2. 我使用的两个限制酶都购自Takara，一个是SnaB I，另外一个是NotI，请问这两个酶使用时需要注意什么？
3.酶是Fermentas的T4连接酶，说明书上是22℃反应，但是很多人用16℃跟4℃，请问那个效果好些？需要连接多长时间？像我这种情况是不是需要用平末端的连接条件（加入PEG）？
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1楼 2012-08-16 18:26:10
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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10楼2014-03-25 19:42:07
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