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yan_cx

木虫 (小有名气)

[求助] 关于细胞活力测定LDH

我要做细胞活力测定的LDH,看文献一般是测LDH的释放率,即上清中释放出的LDH除以总的LDH,但是不知总的LDH 怎么测定?
单纯测上清中的LDH是否可以,能否说明问题?
先谢谢了~~
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陈锐鸿

银虫 (初入文坛)


xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55
乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
(1)        HK-2细胞以2x105/孔浓度接种于24孔板;
(2)        实验前换无血清DMEM/F12培养液孵育24 h,使细胞同步于静止期;
(3)        当HK-2细胞生长至65%~75%融合时,弃上清液,加入含不同浓度AA( 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)的无血清DMEM/F12培养液0.5ml;
(4)        孵育细胞48 h后,吸取培养上清入1.5ml Ep管中待测;
(5)        用冷PBS液清洗细胞2~3次,将冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中,反复冻融吹打3次使细胞充分破裂溶解;
(6)        吸取细胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g(相当于12300ref)离心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。应用全自动生化分析仪检测该上清液LDH值(即细胞内的LDH值)和上述培养上清液中的LDH值;               
(7)        计算各组LDH释放率: LDH释放率(%)=上清液LDH值x 100/(细胞内LDH值十上清液LDH值)。
    我知道就这么多了,,如果你有更具体的麻烦你告知一下我
2楼2014-08-04 01:08:11
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