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关于细胞活力测定LDH
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我要做细胞活力测定的LDH，看文献一般是测LDH的释放率，即上清中释放出的LDH除以总的LDH，但是不知总的LDH 怎么测定? 单纯测上清中的LDH是否可以，能否说明问题？ 先谢谢了~~ |
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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55
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乳酸脱氢酶(LDH)释放实验 （1） HK-2细胞以2x105/孔浓度接种于24孔板； （2） 实验前换无血清DMEM/F12培养液孵育24 h，使细胞同步于静止期； （3） 当HK-2细胞生长至65%～75%融合时，弃上清液，加入含不同浓度AA（ 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml）的无血清DMEM/F12培养液0.5ml； （4） 孵育细胞48 h后，吸取培养上清入1.5ml Ep管中待测； （5） 用冷PBS液清洗细胞2～3次，将冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中，反复冻融吹打3次使细胞充分破裂溶解； （6） 吸取细胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g（相当于12300ref）离心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。应用全自动生化分析仪检测该上清液LDH值（即细胞内的LDH值）和上述培养上清液中的LDH值； （7） 计算各组LDH释放率： LDH释放率(%)＝上清液LDH值x 100/（细胞内LDH值十上清液LDH值）。 我知道就这么多了，，如果你有更具体的麻烦你告知一下我 |
2楼2014-08-04 01:08:11