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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒转化与表达
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒转化与表达

最近做一批重组质粒，测序正确。打算转rosetta和bl21做表达，然而经过好几次的折腾，就是一个菌不长。排除了感受态，抗性，质粒质量及操作过程中的问题，可是依然没能解决问题。我想问一下还有哪些可能的因素影响质粒的转化。还有一个问题，我做了一个NusA做融合伴侣的重组质粒，转化表达质粒成功后不表达，没有移码，用IPTG 0.5mM诱导3h，无任何表达。请大侠们帮忙看看到底是哪里出现了问题。
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1楼 2012-08-09 10:00:45
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 101202139 at 2012-08-11 15:18:47
你可以尝试一下提高转化质粒的体积试一试，然后全部涂在平板上。至于没有表达出来的问题，如果不是移码突变的问题，试一试换换表达载体。

谢谢，我正想这样试试。
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13楼2012-08-11 18:58:25
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无踪无影

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aofeng860308: 金币+20, ★有帮助, 1 2012-08-09 21:50:22
小丹木木: 金币-19, 楼主收回多给的19个金币 2012-08-10 08:15:32
你这没长菌 会不会是菌被你涂板时候烫死了呢？
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一切皆有可能
2楼2012-08-09 15:24:24
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山轻水秀

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2012-08-09 19:50:31
aofeng860308: 回帖置顶 2012-08-09 21:50:47
1.你确定你说的那些都没问题吗，比如抗性，会不会加多了，几乎都杀死了。
2.“重组质粒，测序正确”是什么意思？你的质粒本身就是已经重组完的吗？还是说pcr产物序列正确？如果你经过连接的话，是不是你连接的比例有误？
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万变不离其宗，以明确的计划，灵活的方法，创造属于自己的天地
3楼2012-08-09 15:46:10
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-08-09 15:24:24
你这没长菌 会不会是菌被你涂板时候烫死了呢？

我很多时候不用涂布棒，直接摇匀的，也不长。
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4楼2012-08-09 21:44:52
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