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kunqian11

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA遇到问题,向各位大侠请教

各位大侠,小女子目前正在建立紫杉醇的ELISA检测试剂盒。购买了abcam的anti-taxol antibody,外包做紫杉醇-BSA偶联(具体偶联方法不清)。
     用了两种方式做紫杉醇检测:
    一是紫杉醇偶联BSA后,包被、封闭,加入HRP标记的紫杉醇抗体(稀释倍数仅为200-300倍),加底物进行显色;
    二是包被紫杉醇抗体,封闭,加HRP标记的紫杉醇,加底物进行显色;
    两种试验测试的吸光度值均很低,且增大抗体或紫杉醇浓度后,吸光度值无明显变化。

       推测要么是抗体质量有问题,要么是我们的紫杉醇与BSA的偶联方式影响了亲和位点,导致抗体与紫杉醇亲和力下降。但是具体怎么分析问题的原因,又该采取什么方式进行改进呢?望各位大侠指点,不胜感激。
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kunqian11: 回帖置顶 2012-08-09 13:29:55
wizardfan: 请来回答版主的问题 2012-10-04 14:55:35
紫杉醇直接包被检测是否能跟抗体结合,如果能结合,抗体没问题。
你现在是不是怕小分子包被不上去啊,没问题的,小分子也能直接包被的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-08-08 18:17:28
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查看全部 12 个回答

qjy_134

铜虫 (小有名气)


直接包被紫杉醇  用抗体检测一下
2楼2012-08-08 10:15:18
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kunqian11

新虫 (初入文坛)

★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励应答! 2012-08-08 16:18:19
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-08-08 10:15:18
直接包被紫杉醇  用抗体检测一下

谢谢您的回复,不过紫杉醇必须与BSA偶联后才能进行包被啊。不知您说的是否是这个意思?能否再详细一点?谢谢!
3楼2012-08-08 12:15:19
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-08 18:48:10
你怎么确定是是抗原或抗体的问题呢,其他的试剂都是没有问题的么?还有,抗体不能反复冻融,否则抗性就消失了。总之,确保每个试剂都是好用的,一个一个排除可能导致实验失败的因素。
共同学习,共同进步,共同提高,加油!
4楼2012-08-08 12:58:41
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