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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA纯化试剂盒原理
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西方巍巍

金虫 (小有名气)

[求助] DNA纯化试剂盒原理

刚参加实验，做了DNA纯化，想明白原理，望大牛指教，步骤如下：
1）取10-20微升液体培养的细菌到1.5ml离心管中，加入200微升保护液。
2) 加入10 μL充分悬浮的硅珠悬液，充分混匀，室温放置5 min，期间摇匀2~3次；
3) 10000 rpm室温离心15 s，去上清，再离心5 s，吸干残余液体；
4) 加入200 μL 洗涤液，使白色沉淀充分悬浮；
5) 10000 rpm室温离心15 s，去上清，重复步骤5；
6) 10000 rpm室温离心15 s，去上清，再离心30 s，吸干残余液体，超净台中开盖干燥5 min；
7) 加入约10 μL重蒸水，使硅珠充分悬浮，静置2 min；
8) 13000 rpm室温离心1 min，小心吸取上清至干净无菌的离心管中。
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1楼 2012-08-01 16:14:18
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gungunak47

铁虫 (初入文坛)
不知道楼主用的是 哪家的硅珠
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2楼2012-08-06 14:56:14
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-09 14:18:50
硅珠在法医学上最为常用的。
硅珠用来吸附DNA。
洗涤液用来去除杂质溶剂，例如保护液等。
最后加水将DNA溶解，离心后其上清里就含有你需要的DNA。
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西方巍巍
3楼2012-08-06 18:56:55
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西方巍巍

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gungunak47 at 2012-08-06 14:56:14
不知道楼主用的是 哪家的硅珠

KIt
4楼2012-08-08 15:34:54
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西方巍巍

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-06 18:56:55
硅珠在法医学上最为常用的。
硅珠用来吸附DNA。
洗涤液用来去除杂质溶剂，例如保护液等。
最后加水将DNA溶解，离心后其上清里就含有你需要的DNA。

再问一下，最后得到的DNA样品，检测拉曼光谱，谱峰跟正常的DNA不一样，后来比对保护液和洗涤液发现是他们两者的谱峰，如何才能将DNA中的杂质完全去除，重蒸水多洗几次？
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5楼2012-08-08 15:37:03
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流了 2012-08-09 14:19:03
如果去除杂质，在洗脱DNA前，可以多洗涤一次到两次。其实楼主可以买普通DNA纯化试剂盒如果试验不是非常精确的话，也挺便宜的。如果已经洗脱还有杂质，就只有再次用氯仿异戊醇等将DNA沉淀后，再洗涤，再溶解。
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西方巍巍
6楼2012-08-08 17:11:05
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西方巍巍

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-08 17:11:05
如果去除杂质，在洗脱DNA前，可以多洗涤一次到两次。其实楼主可以买普通DNA纯化试剂盒如果试验不是非常精确的话，也挺便宜的。如果已经洗脱还有杂质，就只有再次用氯仿异戊醇等将DNA沉淀后，再洗涤，再溶解。

问洗涤液怎么最后去除，重蒸水多洗？我的实验猜测可能是DNA相对量较少，并且不容易和拉曼增强的AgNP结合，所以出来的谱峰是保护剂和洗涤剂的
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7楼2012-08-09 09:01:28
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-09 14:19:17
西方巍巍: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-08-10 16:50:07
引用回帖:
7楼: Originally posted by 西方巍巍 at 2012-08-09 09:01:28
问洗涤液怎么最后去除，重蒸水多洗？我的实验猜测可能是DNA相对量较少，并且不容易和拉曼增强的AgNP结合，所以出来的谱峰是保护剂和洗涤剂的...

具体哪个洗涤液成分是什么不清楚，肯定不能用水洗，DNA是溶解于水的，如果用水洗，最后很有可能得不到DNA.  我猜洗涤液里应该有乙醇，有可能是75%的乙醇或许还有其他添加就不清楚了。常规的DNA提取最后洗涤都是用75%乙醇。
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8楼2012-08-09 11:30:34
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