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dragonflydan

金虫 (初入文坛)

[求助] MTT法检测生物学活性注意点,按照2010药典3部做的,就是不成功啊

MTT法检测生物学活性有哪些注意点,按照2010药典3部做的,就是不成功啊
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只有想不到,没有做不到!加油@
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-03 13:28:47
不成功的现象结果是怎样的?

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2楼2012-08-02 09:36:45
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八戒八戒

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-03 13:28:33
你想检测什么?MTT法的原理是通过检测活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶来进行细胞检测,这种方法的漏洞在于若是你的活性蛋白有可能是通过增加或者减少活细胞内的琥珀酸脱氢酶的数量或者活性并没有增加或者减少细胞的总体水平也会出现意想不到的结果

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3楼2012-08-02 11:40:26
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-03 13:29:03
MTT避光,加DMSO前,把液体吸干净,不能有细菌污染等,都会影响OD值

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ForDream!
4楼2012-08-02 12:27:13
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dragonflydan

金虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by conanzzz at 2012-08-02 09:36:45
不成功的现象结果是怎样的?

测出的吸光度0.05左右
只有想不到,没有做不到!加油@
5楼2012-08-02 16:28:21
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dragonflydan

金虫 (初入文坛)

★ ★
送鲜花一朵
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-03 13:29:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 八戒八戒 at 2012-08-02 11:40:26
你想检测什么?MTT法的原理是通过检测活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶来进行细胞检测,这种方法的漏洞在于若是你的活性蛋白有可能是通过增加或者减少活细胞内的琥珀酸脱氢酶的数量或者活性并没有增加或者减少细胞的总体 ...

白介素-2的活性,
A每孔加50μl基础培养基,空白对照加100μl基础培养基。
B 加标准品或供试品溶液: 第一排加50μl 200IU的标准品或供试品,然后依次稀释取50μl加到下孔内,第七排吸出50μl弃掉,第八排不加IL-2。
C 细胞悬液制成5×105/ml,加基础培养基,混匀,每孔加细胞50μl,第8排做阴性对照。放入5%二氧化碳培养箱中37℃培养24h
D 将MTT用0.22μm滤膜过滤后,然后每孔加MTT 10μl,37℃ 5%二氧化碳培养箱中培养4-6h
E 每孔加10%SDS 100μl,37℃ 5%二氧化碳培养箱中培养20h。在570nm处测吸光度
我这样做有什么不对吗,就是不出想要的结果
只有想不到,没有做不到!加油@
6楼2012-08-02 16:36:11
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dragonflydan

金虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by western虫 at 2012-08-02 12:27:13
MTT避光,加DMSO前,把液体吸干净,不能有细菌污染等,都会影响OD值

MTT避光,也没有细菌污染,用SDS代替DMSO还要吸干净吗
只有想不到,没有做不到!加油@
7楼2012-08-02 16:40:43
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是不是因为你的IL-2是PBS或者其他缓冲液配制的?
8楼2012-08-02 23:04:16
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shijunyu0618

至尊木虫 (著名写手)

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小孩,MTT可是个技术活。不是几次就能成功地!
9楼2012-08-03 10:16:25
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dragonflydan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by conanzzz at 2012-08-02 23:04:16
是不是因为你的IL-2是PBS或者其他缓冲液配制的?

IL-2是基础培养基配制的;MTT是PBS配制的,这样不对吗?
只有想不到,没有做不到!加油@
10楼2012-08-03 10:30:33
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