应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/1返回列表
查看: 3450  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

涛哥哥

银虫 (初入文坛)

[交流] 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰

还请各位指出其中错误可能的原因
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 图片.docx
    • 2012-07-26 11:43:49, 307.87 K

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-26 11:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有10个 )

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:58:17
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没啥问题，那就看退火温度。可以采用普通PCR设置不同温度梯度进行扩增后跑琼脂糖电泳看哪个温度下有条带，确定基本合适的温度
（3）RNA模板可能也有问题，看看测浓度是OD值是多少，反转录后DNA模板浓度多少，进行定量时添加量也要适当
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-26 20:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-26 20:05:09
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没 ...

我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多少啊？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-07-27 11:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 11:01:40
我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多 ...

RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-27 14:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-27 14:33:24
RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300...

是体系里的模板终浓度吗？ 我用的机子是7500
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-27 16:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
内容已删除
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-27 18:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-27 18:59:00
两个机子可能还是会有差异的。不是终浓度，是200~300的加了1ul...

我正在摸条件 模板换成DNA溶解曲线也是有多个峰
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-27 23:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 23:28:43
我正在摸条件 模板换成DNA溶解曲线也是有多个峰...

先跑普通PCR摸退火温度吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-28 14:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-28 14:35:34
先跑普通PCR摸退火温度吧...

您说的普通PCR是用7500跑还是用普通PCR仪做   我的目的基因退火温度以前做多态时摸过啊
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-28 16:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
建议在ＤＮＡ水平上做个预实验确定一下退火温度，这对于后续的实时定量是很有帮助的
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-28 21:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-28 21:22:53
建议在ＤＮＡ水平上做个预实验确定一下退火温度，这对于后续的实时定量是很有帮助的

我前段时间一直做这个  跑的图就是在最适退火温度下做的啊
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-28 21:39:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 涛哥哥 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +11 nnnnnnn5 2026-03-25 11/550 2026-03-29 20:42 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +4 笃行致远. 2026-03-28 4/200 2026-03-29 11:55 by longlotian
[考研] 332求调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 求化学调剂 +4 wulanna 2026-03-28 4/200 2026-03-28 13:37 by 唐沐儿
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 287求调剂 +10 land xuxu 2026-03-26 10/500 2026-03-27 15:33 by 帕尔马拉特
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭