应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰
111/1返回列表
查看: 3643  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

涛哥哥

银虫 (小有名气)

[交流] 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰

还请各位指出其中错误可能的原因
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 图片.docx
    • 2012-07-26 11:43:49, 307.87 K

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-26 11:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-26 20:05:09
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没 ...

我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多少啊？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-07-27 11:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:58:17
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没啥问题，那就看退火温度。可以采用普通PCR设置不同温度梯度进行扩增后跑琼脂糖电泳看哪个温度下有条带，确定基本合适的温度
（3）RNA模板可能也有问题，看看测浓度是OD值是多少，反转录后DNA模板浓度多少，进行定量时添加量也要适当
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-26 20:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 11:01:40
我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多 ...

RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-27 14:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-27 14:33:24
RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300...

是体系里的模板终浓度吗？ 我用的机子是7500
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-27 16:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
6楼2012-07-27 18:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-27 18:59:00
两个机子可能还是会有差异的。不是终浓度，是200~300的加了1ul...

我正在摸条件 模板换成DNA溶解曲线也是有多个峰
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-27 23:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 23:28:43
我正在摸条件 模板换成DNA溶解曲线也是有多个峰...

先跑普通PCR摸退火温度吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-28 14:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-28 14:35:34
先跑普通PCR摸退火温度吧...

您说的普通PCR是用7500跑还是用普通PCR仪做   我的目的基因退火温度以前做多态时摸过啊
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-28 16:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
建议在ＤＮＡ水平上做个预实验确定一下退火温度，这对于后续的实时定量是很有帮助的
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-28 21:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-28 21:22:53
建议在ＤＮＡ水平上做个预实验确定一下退火温度，这对于后续的实时定量是很有帮助的

我前段时间一直做这个  跑的图就是在最适退火温度下做的啊
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-28 21:39:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 涛哥哥 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:30 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:21 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:57 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:23 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:36 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭