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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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涛哥哥

银虫 (初入文坛)


[交流] 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰

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gy313wyn

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 11:01:40
我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多 ...

RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300
4楼2012-07-27 14:33:24
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gy313wyn

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:58:17
由于几个基因的条带比较杂乱,可能共有的原因是
(1)引物特异性不好。如果是在文献中查找的,要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列,要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
(2)如果引物没啥问题,那就看退火温度。可以采用普通PCR设置不同温度梯度进行扩增后跑琼脂糖电泳看哪个温度下有条带,确定基本合适的温度
(3)RNA模板可能也有问题,看看测浓度是OD值是多少,反转录后DNA模板浓度多少,进行定量时添加量也要适当
2楼2012-07-26 20:05:09
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涛哥哥

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-26 20:05:09
由于几个基因的条带比较杂乱,可能共有的原因是
(1)引物特异性不好。如果是在文献中查找的,要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列,要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
(2)如果引物没 ...

我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多少啊?
3楼2012-07-27 11:01:40
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涛哥哥

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
4楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-27 14:33:24
RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300...

是体系里的模板终浓度吗? 我用的机子是7500
5楼2012-07-27 16:47:18
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