应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰
51/1返回列表
查看: 3705  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)

[交流] 最近两次的荧光定量溶解曲线 有多个峰

还请各位指出其中错误可能的原因
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 图片.docx
    • 2012-07-26 11:43:49, 307.87 K

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-26 11:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 23:28:43
我正在摸条件 模板换成DNA溶解曲线也是有多个峰...

先跑普通PCR摸退火温度吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-28 14:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
涛哥哥(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-26 21:58:17
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没啥问题，那就看退火温度。可以采用普通PCR设置不同温度梯度进行扩增后跑琼脂糖电泳看哪个温度下有条带，确定基本合适的温度
（3）RNA模板可能也有问题，看看测浓度是OD值是多少，反转录后DNA模板浓度多少，进行定量时添加量也要适当
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-26 20:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涛哥哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-26 20:05:09
由于几个基因的条带比较杂乱，可能共有的原因是
（1）引物特异性不好。如果是在文献中查找的，要到NCBI里进行比对看是不是目的基因的引物序列，要注意选择影响因子较高的文章中的引物可信性较高。
（2）如果引物没 ...

我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多少啊？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-07-27 11:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gy313wyn

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 涛哥哥 at 2012-07-27 11:01:40
我用这些引物做多态都很好的  持家基因以前也有师兄做过  
RNA模板的OD值确实很多不在正常范围  反转录后的浓度2000左右  我的图就是转录后的DNA按十倍梯度稀释后的相对标准曲线   请问您的反应体系cDNA添加量是多 ...

RNA OD260/280还是要在2左右为好
我用的机子是7300的机子  10ul体系加1ul模板 模板浓度200~300
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-27 14:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭