应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌RNA提取测得的OD值一直低于1.8
101/1返回列表
查看: 3390  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yly0511

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌RNA提取测得的OD值一直低于1.8

如题，请教各位分子生物的专家们，我是食品专业的，没有做过这方面的实验，做了几次提取测得的OD值都是低于1.8，各位能帮忙提点建议可能是什么原因，要怎么解决呢？？多谢多谢啦！！着急呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-24 21:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌RNA一般都很好抽提的。用试剂盒就可以，OD低于1.8主要是蛋白没有去干净。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-24 22:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 很热心，很仔细哦 2012-07-25 14:15:47
还是蛋白的问题，是用什么方法提取的呢？
蛋白质是污染RNA 样品的又一个重要因素。由于RNase和多酚氧化酶亦属于蛋白质，因而要获得完整的、高质量的RNA 就必须有效地去除蛋白杂质。常规的方法是在冷冻的条件下研磨植物材料以抑制RNase等的活性；提取缓冲液中含有蛋白质变性剂，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）等，这样在匀浆时可以使蛋白质变性，凝聚；有的方法是利用蛋白酶K来降解蛋白杂质。进一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白质。

Wilcockson利用蛋白质与RNA 在高氯酸钠溶液中的溶解度不同将它们分离。在70%高氯酸钠溶液中，RNA 的溶解度大于蛋白质的溶解度，因而将大部分蛋白质沉淀下来。接着在离心上清液中加入两倍体积的无水乙醇，这时RNA 能沉淀下来而能溶于70%高氯酸钠溶液中的残留蛋白质仍然留在上清液中。这样可以除去绝大部分的蛋白质。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-24 22:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在都用试剂盒提取RNA，去蛋白的效果很好的，提取完毕我个人建议测浓度和用琼脂糖凝胶检测同时进行！会得到更准确的结果
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
4楼2012-07-25 10:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yly0511

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-07-24 22:30:28
大肠杆菌RNA一般都很好抽提的。用试剂盒就可以，OD低于1.8主要是蛋白没有去干净。

我提取的大肠杆菌RNA是经过微乳液处理过后的，微乳液液体粘度比较大，在离心后不能倾倒的很干净，这方面是不是会有影响呢？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-25 12:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yly0511

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-25 10:46:38
现在都用试剂盒提取RNA，去蛋白的效果很好的，提取完毕我个人建议测浓度和用琼脂糖凝胶检测同时进行！会得到更准确的结果

用试剂盒和用trizol（其他试剂自己配置）会有很大区别吗？
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-25 12:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们这边第一步肯定也是用trizol。菌体经液氮冷冻后碾磨成粉末或用专门的振荡破碎仪破碎菌体后，将少量菌体加入到trizol中，切记菌体量不要太多（1 ml trizol也就加绿豆大小量的菌体），否则会造成后续蛋白去不干净。后续的步骤都用试剂盒了。试剂自己配的话难免出问题，再说试剂盒也不贵。
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-26 08:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yly0511

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-07-26 08:20:36
我们这边第一步肯定也是用trizol。菌体经液氮冷冻后碾磨成粉末或用专门的振荡破碎仪破碎菌体后，将少量菌体加入到trizol中，切记菌体量不要太多（1 ml trizol也就加绿豆大小量的菌体），否则会造成后续蛋白去不干净 ...

我处理的时候是将悬浮细菌离心后加入trizol，没有进行液氮研磨，在trizol的说明书里也没有这一步，不知道是不是这不影响？还是就是你说的绿豆大小的菌体是指离心后的还是菌液大小呢？
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-26 08:59:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是指液氮碾磨后的菌体
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-26 12:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mabinbin0209

新虫 (初入文坛)
想请教一下楼主，你后来是否成功提取出了未降解的RNA，我提的总是降解很明显，但是OD都接近于2.0,有时高有时低，但是电泳观察降解很明显
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-02 20:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yly0511 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +5 xqy2009 2026-10-13 5/250 2026-10-15 09:49 by 淘淘塑物性通
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭