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大肠杆菌RNA提取测得的OD值一直低于1.8
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| 如题，请教各位分子生物的专家们，我是食品专业的，没有做过这方面的实验，做了几次提取测得的OD值都是低于1.8，各位能帮忙提点建议可能是什么原因，要怎么解决呢？？多谢多谢啦！！着急呢 |
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sd3824289
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4楼2012-07-25 10:46:38
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 很热心，很仔细哦 2012-07-25 14:15:47
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还是蛋白的问题，是用什么方法提取的呢？ 蛋白质是污染RNA 样品的又一个重要因素。由于RNase和多酚氧化酶亦属于蛋白质，因而要获得完整的、高质量的RNA 就必须有效地去除蛋白杂质。常规的方法是在冷冻的条件下研磨植物材料以抑制RNase等的活性；提取缓冲液中含有蛋白质变性剂，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）等，这样在匀浆时可以使蛋白质变性，凝聚；有的方法是利用蛋白酶K来降解蛋白杂质。进一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白质。 Wilcockson利用蛋白质与RNA 在高氯酸钠溶液中的溶解度不同将它们分离。在70%高氯酸钠溶液中，RNA 的溶解度大于蛋白质的溶解度，因而将大部分蛋白质沉淀下来。接着在离心上清液中加入两倍体积的无水乙醇，这时RNA 能沉淀下来而能溶于70%高氯酸钠溶液中的残留蛋白质仍然留在上清液中。这样可以除去绝大部分的蛋白质。 |
3楼2012-07-24 22:34:58
5楼2012-07-25 12:35:51
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