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huojinlong8610

金虫 (小有名气)

[求助] 翻译 分子生物学

分别提取猪18种组织的RNA,反转录为cDNA,利用RT-PCR方法扩增肿瘤坏死因子(TNF-α)基因编码区序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH 5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他物种构建系统进化树。同时采用半定量RT-PCR方法分析TNF-α基因在猪18种组织中的表达情况。结果显示,猪TNF-α基因编码区全长699 bp(GenBank登录号:JF831365),其编码232个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,与猫等12个物种具有80%以上的相似性,分子系统进化研究表明与牛、山羊、绵羊及海豚的关系较近。多组织半定量RT-PCR研究表明TNF-α mRNA在猪的多个组织中均有表达,其中在中脑、卵巢、脾、肺、神经及胃中表达量较高。


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quzuoyin

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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8814402(金币+2): 鼓励新手!欢迎常来。 2011-08-14 16:20:53
sltmac(金币+2): 追加奖励,欢迎常来~ 2011-08-15 09:08:07
huojinlong8610(金币+50, 翻译EPI+1): 非常感谢! 2011-08-15 17:41:41
sltmac: 欢迎常来本版交流~~ 2011-08-16 08:56:19
sltmac(金币+50): 感谢应助~ 2011-08-17 08:50:30
We extracted RNA from 18 kinds of pig tissues separately,anti-transcripted them to cDNA,and used RT-PCR method to amplify the gene code aera sequences of tumor necrosis factor,then jointed the purified sequences with pMD18-T carrier to transform E.coli. Positive clones were screened and their sequences were determined.Using bio-information method to analyse their characters,system evolution tree was set up with other species.Meanwhile,we used semi-quantitative RT-PCR method to analyse the expression of TNF-α gene in 18 kinds of pig tissues . The result showed the whole length of pig TNF-α gene code aera was 699 bp(GenBank accession number:JF831365 ),it coded 232 amino acids. The amino acid homology analysis showed it had over 80% homology with 12 species like cat,molecular system evolution research indicated it had a close relation with cattle,goat,sheep and dolphin.Multi-tissues semiquantitative RT-PCR study showed TNF-α mRNA expressed in several tissues of pig,and its expression was higher in brain,ovary,spleen,lung,neuro and stomach.
新手,不足之处还望大家多多指教
2楼2011-08-14 13:46:19
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