应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！
111/2返回列表12下一页
查看: 1010  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小头萝卜

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！

我要做的是把一个6000多bp的片段连接到一个5000多bp的一个载体上。最后做了双酶切实验，切出了两条带，并且与marker（12000-500）相对照，大小正确，而且做了阴性对照。但是送去测序，结果显示是空载体。我想问一下，这是为什么呢？难道是目的片段丢失了？谢谢大家了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-24 08:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-24 10:16:44
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
2楼2012-07-24 09:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 10:18:19
你的目的片段是6000bp还是600bp呀，你是不是写错了，如果连接成功的话，想你的这种情况，就不用双酶切了，质粒跑胶就可以了。最好上图。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-24 09:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-24 09:15:38
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！

好的，我再试试。谢谢了！
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-24 10:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 09:47:27
你的目的片段是6000bp还是600bp呀，你是不是写错了，如果连接成功的话，想你的这种情况，就不用双酶切了，质粒跑胶就可以了。最好上图。

是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-24 10:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小头萝卜: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 10:57:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小头萝卜 at 2012-07-24 10:18:14
是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。...

6000加5000都一万多了，跑胶还看不出来吗？如果不对的话，可能是你的载体上有你双酶切的酶切位点。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
6楼2012-07-24 10:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 10:37:00
6000加5000都一万多了，跑胶还看不出来吗？如果不对的话，可能是你的载体上有你双酶切的酶切位点。...

嗯。我再跑个试试吧。谢谢了！
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-24 10:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2 2012-08-03 13:32:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小头萝卜 at 2012-07-24 10:18:14
是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。...

我认为在你连接转化提质粒后，在做酶切验证的时候，对于你的情况，在做双酶切时，不仅要用连接时接头2个酶切位点，还要选一对片段中和载体上得2个酶切位点来做验证。另外，载体连入片段后，单酶切线性化也是一定要做的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-24 15:04:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-24 15:04:16
我认为在你连接转化提质粒后，在做酶切验证的时候，对于你的情况，在做双酶切时，不仅要用连接时接头2个酶切位点，还要选一对片段中和载体上得2个酶切位点来做验证。另外，载体连入片段后，单酶切线性化也是一定要 ...

嗯，谢谢了！单酶切线性化我一直都没做过，看来是得做做。谢谢你的建议。
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-03 13:33:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxm520zyc

木虫 (正式写手)
你的目的片段好大啊，即使你连上了，如果用常规测序的话，可能都测不出来，一般超过1000bp就好难测了~
赞一下 回复此楼
学习中~
10楼2012-08-04 14:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小头萝卜 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭