应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！
111/2返回列表12下一页
查看: 1014  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小头萝卜

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！

我要做的是把一个6000多bp的片段连接到一个5000多bp的一个载体上。最后做了双酶切实验，切出了两条带，并且与marker（12000-500）相对照，大小正确，而且做了阴性对照。但是送去测序，结果显示是空载体。我想问一下，这是为什么呢？难道是目的片段丢失了？谢谢大家了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-24 08:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-24 10:16:44
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
2楼2012-07-24 09:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 10:18:19
你的目的片段是6000bp还是600bp呀，你是不是写错了，如果连接成功的话，想你的这种情况，就不用双酶切了，质粒跑胶就可以了。最好上图。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-24 09:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-24 09:15:38
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！

好的，我再试试。谢谢了！
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-24 10:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 09:47:27
你的目的片段是6000bp还是600bp呀，你是不是写错了，如果连接成功的话，想你的这种情况，就不用双酶切了，质粒跑胶就可以了。最好上图。

是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-24 10:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小头萝卜: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 10:57:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小头萝卜 at 2012-07-24 10:18:14
是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。...

6000加5000都一万多了，跑胶还看不出来吗？如果不对的话，可能是你的载体上有你双酶切的酶切位点。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
6楼2012-07-24 10:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 10:37:00
6000加5000都一万多了，跑胶还看不出来吗？如果不对的话，可能是你的载体上有你双酶切的酶切位点。...

嗯。我再跑个试试吧。谢谢了！
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-24 10:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2 2012-08-03 13:32:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小头萝卜 at 2012-07-24 10:18:14
是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。...

我认为在你连接转化提质粒后，在做酶切验证的时候，对于你的情况，在做双酶切时，不仅要用连接时接头2个酶切位点，还要选一对片段中和载体上得2个酶切位点来做验证。另外，载体连入片段后，单酶切线性化也是一定要做的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-24 15:04:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-24 15:04:16
我认为在你连接转化提质粒后，在做酶切验证的时候，对于你的情况，在做双酶切时，不仅要用连接时接头2个酶切位点，还要选一对片段中和载体上得2个酶切位点来做验证。另外，载体连入片段后，单酶切线性化也是一定要 ...

嗯，谢谢了！单酶切线性化我一直都没做过，看来是得做做。谢谢你的建议。
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-03 13:33:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxm520zyc

木虫 (正式写手)
你的目的片段好大啊，即使你连上了，如果用常规测序的话，可能都测不出来，一般超过1000bp就好难测了~
赞一下 回复此楼
学习中~
10楼2012-08-04 14:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小头萝卜 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 269专硕求调剂 +5 金恩贝 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:37 by zhyzzh
[考研] 354求调剂 +6 Tyoumou 2026-03-18 9/450 2026-03-21 20:47 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +5 十三加油 2026-03-21 5/250 2026-03-21 18:48 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭