应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 1078  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家帮我分析分析，谢谢了！

我要做的是把一个6000多bp的片段连接到一个5000多bp的一个载体上。最后做了双酶切实验，切出了两条带，并且与marker（12000-500）相对照，大小正确，而且做了阴性对照。但是送去测序，结果显示是空载体。我想问一下，这是为什么呢？难道是目的片段丢失了？谢谢大家了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-24 08:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2 2012-08-03 13:32:31
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小头萝卜 at 2012-07-24 10:18:14
是6000bp，没有写错，目的片段是有些大。麻烦再问一下，为什么不用双酶切，直接跑胶就可以了？谢谢了。...

我认为在你连接转化提质粒后，在做酶切验证的时候，对于你的情况，在做双酶切时，不仅要用连接时接头2个酶切位点，还要选一对片段中和载体上得2个酶切位点来做验证。另外，载体连入片段后，单酶切线性化也是一定要做的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-24 15:04:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-24 10:16:44
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
2楼2012-07-24 09:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小头萝卜: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 10:18:19
你的目的片段是6000bp还是600bp呀，你是不是写错了，如果连接成功的话，想你的这种情况，就不用双酶切了，质粒跑胶就可以了。最好上图。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-24 09:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小头萝卜

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-24 09:15:38
你也可以这样试一下，用单酶切把质粒切一下试试，两个酶分别切一下试试！我也遇到过这样的问题！

好的，我再试试。谢谢了！
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-24 10:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 273求调剂 +4 白居不易. 2026-04-09 6/300 2026-04-14 19:54 by 逆水乘风
[考研] 通信工程求调剂！！！ +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 材料类284调剂 +41 想换手机不想解� 2026-04-08 49/2450 2026-04-14 17:53 by lhj2009
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 310求调剂 +15 666真好 2026-04-11 17/850 2026-04-13 22:27 by pies112
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂，接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭