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小头萝卜

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家帮我分析分析,谢谢了!

我要做的是把一个6000多bp的片段连接到一个5000多bp的一个载体上。最后做了双酶切实验,切出了两条带,并且与marker(12000-500)相对照,大小正确,而且做了阴性对照。但是送去测序,结果显示是空载体。我想问一下,这是为什么呢?难道是目的片段丢失了?谢谢大家了!
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小头萝卜

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 09:47:27
你的目的片段是6000bp还是600bp呀,你是不是写错了,如果连接成功的话,想你的这种情况,就不用双酶切了,质粒跑胶就可以了。最好上图。

是6000bp,没有写错,目的片段是有些大。麻烦再问一下,为什么不用双酶切,直接跑胶就可以了?谢谢了。
5楼2012-07-24 10:18:14
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小头萝卜: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-24 10:16:44
你也可以这样试一下,用单酶切把质粒切一下试试,两个酶分别切一下试试!我也遇到过这样的问题!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
2楼2012-07-24 09:15:38
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小头萝卜: 金币+1, 有帮助 2012-07-24 10:18:19
你的目的片段是6000bp还是600bp呀,你是不是写错了,如果连接成功的话,想你的这种情况,就不用双酶切了,质粒跑胶就可以了。最好上图。
coasttocoast。
3楼2012-07-24 09:47:27
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小头萝卜

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-24 09:15:38
你也可以这样试一下,用单酶切把质粒切一下试试,两个酶分别切一下试试!我也遇到过这样的问题!

好的,我再试试。谢谢了!
4楼2012-07-24 10:16:32
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